J.K. Park1, A.Y. Kim1,2, E.M. Lee1,2, E.J. Lee1,2, D.M. Kwak1,2, I.H. Hong1, J.M. Cullen3, K.S. Jeong1,2
1 Колледж ветеринарной медицины, национальный университет кианпук, Дегу, Корея
2 Институт исследований терапии стволовыми клетками, Национальный университет Кианпук, Дегу, Корея
3 Колледж ветеринарной медицины, Государственный университет Северной Каролины, Роли, Северная Каролина, США
Миграция личинок паразитов в различные органы организма-хозяина является важным компонентом жизненного цикла многих паразитов. Личинки различных паразитов могут населять множество органов, включая сердце, лёгкие и кишечник, где они завершают свой жизненный цикл и достигают половой зрелости. Однако также встречается анормальная миграция паразитов в нетипичные места, такие как нервная, репродуктивная, мочевыделительная, костно-мышечная системы, что приводит к дополнительному травмированию тканей. В ветеринарной литературе раннее несколько работ описывали подобное нетипичное распространение, при котором личинки паразитов встречались в спинном мозге [Gomez et al. 2010; Johnson et al. 2010], головном мозге [Tanabe et al. 2007], почках [Aresu et al. 2007], глазу [Dantas-Torres et al. 2009] и суставных полостях [Hodges and Rishniw 2008]. Эти работы позволили провести много важных дифференциальных диагнозов с учётом клинических признаков и патологических изменений, которые могут возникнуть в результате нетипичного жизненного цикла паразита. По нашим сведениям, данный доклад впервые описывает случай гранулематозного метрита у собаки, который был вызван аберрантной миграцией личинок нематод, определённых как Dirofilaria immitis.
Описание клинического случая
8-летняя сука породы мальтийская болонка была доставлена в частную ветеринарную клинику с анорексией, в угнетённом состоянии и с выделениями из влагалища. Результаты биохимического анализа сыворотки крови были в пределах физиологической нормы, однако полный клинический анализ крови выявил лейкоцитоз (31 600 клеток/мкл при норме 6 000–17 000 клеток/мкл). Тест на определение антигенов Dirofilaria immitis дал отрицательный результат. Основываясь на первичных обнаружениях, включая рентгеновские снимки в боковой проекции, которые показывали сильно расширенную матку (фото 1). Так как все клинические признаки указывали на пиометру, было решено провести оперативное вмешательство. В процессе операции в левом роге матки было обнаружено новообразование диаметром примерно 5 см с множественными кровоизлияниями. Также были обнаружены спайки, сформированные между подлежащими мягкими тканями, включая толстый кишечник. Из-за обширной распространённости спаек было решено провести овариогистерэктомию. В целях фиксации матка и новообразование были помещены в 10% раствор формалина в нейтральном буфере. Зафиксированные ткани были отправлены в отделение Ветеринарной патологии Национального университета Кианпук (Корея), где были подвергнуты гистопатологическому исследованию.
 |
|
Фото 1. Рентгеновские снимки боковой проекции брюшной полости, показывающие заметно расширенную матку (стрелки). |
При обследовании невооружённым глазом было установлено, что новообразование составляло примерно 5 см в диаметре (фото 2а) и полностью заместило левый рог матки. На срезе новообразование покрыто соединительнотканной капсулой, окружающей некротический центр, содержащий пучки многочисленных белёсых сплетённых между собой ниточных личинок (фото 2b). Нематоды были легко удалены из полости маточного новообразования. Гистологически новообразование характеризовалось хаотично расположенными участками гранулематозного воспаления и некроза. Также оно содержало значительное количество воспалительного экссудата, состоящего из эпителиальных макрофагов, гигантских клеток, указывающих на реакцию на инородное тело, гигантских клеток Лангханса, лимфоцитов, плазматических клеток, нейтрофилов и фибробластов, что является типичным признаком гранулематозного воспаления (фото 3а). Гранулёмы с пучками спутанных ниточных личинок также наблюдались в эндометрии и внутренней части миометрия левого рога матки (фото 3а). Были найдены поперечные и продольные сечения нематод, окружённые зоной некроза и воспаления, характеризующиеся дегенеративными клетками, клеточным дебрисом, нейтрофилами и макрофагами, включая эпителиальные макрофаги и многоядерные гигантские клетки (фото 3b, c). В общем, очаги некроза были связаны с присутствием разрушенных или мёртвых нематод (фото 3d). Фрагменты распавшихся ниточных нематод были найдены внутри макрофагов и многоядерных гигантских клеток на всем протяжении поражённого рога матки.
 |
 |
|
Фото 2а. Левый рог матки. |
Фото 2b. Поверхность среза, демонстрирующая некротический центр (стрелка), окружённый плотной капсулой из соединительной ткани. |
 |
|
Фото 3а. Множественные гранулёмы в эндометрии и миометрии поражённого рога матки. Показаны пучки сплетённых личинок ниточных нематод (чёрная стрелка) и новые сформированные гранулёмы (белая стрелка); гематоксилин-эозин, шкала измерения = 400 мкм. |
Хотя ниточные личинки были на разных стадиях дегенерации, для идентификации были доступны остатки кутикулы. Отдельные личинки имели ширину 8–15 мкм и длину 1,6–2,0 мм (фото 4а, b). Личинки имели острые, слегка суженные головные концы и прямые острые хвосты (фото 4b). Чехлик отсутствовал, и на толстой кутикуле было заметно поперечная исчерченность. Головное пространство было коротким, головного крючка не было видно (фото 4c). Все эти гистологические особенности помогли определить белых ниточных нематод как членов семейства Onchocercidae.
 |
|
Фото 4а. Пучки сплетённых личинок нематод, изолированные с поверхности среза новообразования матки, световая микроскопия, 100× увеличение, шкала = 200 мкм. |
Обсуждение и выводы
В данной статье мы даём описание тяжёлого случая гранулематозного метрита у собаки, вызванного миграцией филярных личинок нематод. Ниточные нематоды были идентифицированы как неполовозрелые личинки, принадлежащие семейству Onchocercidae, основываясь на морфологических свидетельствах, таких как отсутствие чехлика, острый слегка суженный головной конец и острый прямой хвост. Семейство Onchocercidae входит в суперсемейство Filarioidea и включает 70–80 родов [Anderson 2000]. Среди видов Onchocercidae такие виды, как Brugia malayi, Brugia pahangi, Cercopithifilaria grassi, Dipetalonema reconditum, Dipetalonema dracunculoides, Dirofilaria immitis, и Dirofilaria repense известны своей способностью вызывать заболевания у собак [Anderson 2000]. Кроме того, несколько исследований показали, что различные виды нематод, включая Dirofilaria repense, Dipetalonema reconditum, Dipetalonema dracunculoides, Cercopithifilaria grassi, Brugia malayi, Brugia ceylonensis, и Brugia pahangi характеризуются микрофиляриемией и отрицательным результатом теста на антиген дирофилярий [Fischer et al. 2002; Genchi et al. 2005]. Таким образом, нитевидные личинки, идентифицированные в данной работе, должны быть дифференцированы от личинок других видов дирофилярий.
Тест Кнотта широко известен как эффективный диагностический метод для идентификации микрофилярий нескольких филярных нематод [Mylonakis et al. 2004; Pantchev et al. 2009]. В данной работе тест Кнотта не был проведён в местной ветеринарной клинике потому, что тест на антиген Dirofilaria immitis дал отрицательный результат. Таким образом, мы не смогли подтвердить наличие микрофилярий в образцах свежей крови. Хотя тест Кнотта не был проведён, многочисленные личинки, легко изолированные из новообразования матки, позволили провести морфологическое исследование.
Инвазии, вызываемые Brugia malayi, Brugia pahangi, Cercopithifilaria grassi и Dipetalonema dracunculoides были исключены, основываясь на морфологии чехлика [Sreter and Szell 2008; Ciocan et al. 2010; Kariuki et al. 2010]. Поэтому были рассмотрены другие инвазионные заболевания, вызываемые Dirofilaria immitis, Dirofilaria repens и Dipetalonema reconditum. С целью более точного определения вида паразита, мы провели генотипирование методом ПЦР из образцов ткани матки, фиксированной в формалине, но все результаты ПЦР-реакций на Dirofilaria immitis, Dirofilaria repens, и Dipetalonema reconditum были отрицательны. Мы полагаем, что данный тест вполне мог дать ложно-отрицательные результаты, так как образцы ДНК, выделенные из фиксированной в формалине ткани, часто непригодны для проведения ПЦР-диагностики [Reed et al. 2009].
Tarello отмечает, что дифференциальный диагноз на Dirofilaria immitis, Dirofilaria repens, или Dipetalonema reconditum определяется преимущественно морфологическими характеристиками микрофилярий [Tarello 2003]. Genchi и другие также упоминают о морфологических характеристиках микрофилярий Dirofilaria spp., Dipetalonema reconditum, Dipetalonema dracuncloides, и Cercopitifilaria grassi, поражающих собак [Genchi et al. 2005]. Согласно исследованию, для микрофилярий Dirofilaria immitis характерно отсутствие чехлика, острый головной конец, прямой хвост, ширина 5–7 мм и длина 290–330 мм. Несколько других исследовательских групп также отмечали слегка суженную голову и прямой острый хвост в качестве признаков, имеющих важное диагностическое значение и составляющих уникальные особенности микрофилярий Dirofilaria immitis [Genchi et al. 2005; Rishniw et al. 2006; Ciocan et al. 2010]. В данном случае возможность инвазии Dirofilaria repens была исключена на основании морфологических характеристик этого паразита, таких как притупленный головной конец, нитевидный хвост с концом, напоминающим ручку зонта. Инвазия Dipetalonema reconditum была также исключена, так как данный паразит имеет тупой головной конец с выступающим крюком и хвост, напоминающий кнопку-крюк. Описанные в литературе характеристики Dirofilaria immitis совпадали с признаками, выявленными в нашем случае. Основываясь на ранних сообщениях о диагностически важных морфологических особенностях личинок, мы смогли дифференцировать выделенных нематод от других паразитов семейства Onchocercidae. Хотя мы не смогли точно идентифицировать тип нитевидных нематод с помощью молекулярных технологий, мы делаем вывод, что данные организмы были наиболее вероятно личинками Dirofilaria immitis, основываясь на сравнительных морфологических характеристиках.
Жизненный цикл Dirofilaria immitis включает пять личиночных стадий (от L1 до L5). Стадия L3, которая является основной инвазивной стадией Dirofilaria immitis, линяет и превращается в L4 личинку в подкожной клетчатке, жировой ткани и скелетной мускулатуре инфицированных животных [Atkins 2005]. L4 личинка затем линяет в L5 неполовозрелую взрослую особь Dirofilaria immitis, и мигрирует к сердцу и лёгочным артериям [Atkins 2005]. Основываясь на ранних сообщениях и наших находках при микроскопии, таких как диаметр и длину нитевидных нематод, мы полагаем, что личинки нитевидных нематод могут находиться на L3–L4 стадиях.
До настоящего времени в ветеринарной литературе не было описано случаев гранулематозного метрита, вызванного личинками нитевидных нематод. Кроме того, только несколько исследований описывали аберрантную миграцию паразитов в уникальные анатомические места у собак, включая глаз [Dantas-Torres et al. 2009], подвижный сустав [Hodges and Rishniw 2008], и почки [Aresu et al. 2007]. Здесь мы описываем первый случай аберрантного дирофиляриоза матки у собаки, результатом которого стал гранулематозный метрит. Основываясь на данном случае, мы предполагаем, что атипичная миграция личинок филярий должна быть включена в дифференциальный диагноз у собак с новообразованиями матки.
Благодарности
Это исследование было проведено при поддержке Исследовательского фонда Национального университета Киунпук, 2012 год.
Источник: Veterinary Medicina 58, 2013 (8): 437–441.
This is an Open Access article distributed under the terms of the Creative Commons Attribution License (http://creativecommons.org/licenses/by/2.0), which permits unrestricted use, distribution, and reproduction in any medium, provided the original work is properly cited.
Список литературы
1. Anderson RC (2000): Family of Onchocercidae. In: Anderson RC (ed.): Nematode Parasites of Vertebrates: Their Development and Transmission. 2nd ed. CABI Publishing, Wallingford, England. 472–532.
2. Aresu L, Valenza F, Ferroglio E, Pregel P, Uslenghi F, Tarducci A, Zanatta R (2007): Membranoproliferative glomerulonephritis type III in a simultaneous infection of Leishmania infantum and Dirofilaria immitis in a dog. Journal of Veterinary Diagnostic Investigation 19, 569–572.
3. Atkins C (2005): Canine heartworm disease. In: Ettinger SJ, Feldman EC (eds): Textbook of Veterinary Internal Medicine. 6th ed. Elsevier, St. Louis, MO. 1118–1136.
4. Ciocan R, Darabus G, Igna V (2010): Morphometric study of microfilariae of Dirofilaria spp. on dogs. Bulletin UASVM, Veterinary Medicine 67, 45–49.
5. Dantas-Torres F, Lia RP, Barbuto M, Casiraghi M, Crovace A, Caligiani L, Genchi C, Otranto D (2009): Ocular dirofilariosis by Dirofilaria immitis in a dog: first case report from Europe. Journal of Small Animal Practice 50, 667–669.
6. Fischer P, Wibowo H, Pischke S, Ruckert P, Liebau E, Ismid IS, Supali T (2002): PCR-based detection and identification of the filarial parasite Brugia timori from Alor Island, Indonesia. Annals of Tropical Medicine and Parasitology 96, 809–821.
7. Genchi C, Venco L, Genchi M (2005): Guidelines for the laboratori diagnosis of canine and feline Dirofilaria Infections. Mappe Parassitologiche 8, 13–144.
8. Gomez M, Mieres M, Moroni M, Mora A, Barrios N, Simeone C, Lindsay DS (2010): Meningomyelitis due to nematode infection in four cats. Veterinary Parasitology 170, 32–330.
9. Hodges S, Rishniw M (2008): Intraarticular Dirofilaria immitis microfilariae in two dogs. Veterinary Parasi- tology 152, 16–170.
10. Johnson JS, Hibler CP, Tillotson KM, Mason GL (2010): Radiculomeningomyelitis due to Halicephalobus gin- givalis in a horse. Veterinary Parasitology 38, 55–561.
11. Kariuki MM, Hearne LB, Beerntsen BT (2010): Differential transcript expression between the microfilariae of the filarial nematodes, Brugia malayi and B. pahangi. BMC Genomics 11, 225.
12. Mylonakis ME, Papadopoulos E, Koutinas AF, Paitaki C, Leontides L (2004): Comparative methodology for the detection and differentiation of circulating microfilariae of Dirofilaria immitis in the dog. Journal of Helminthology 78, 13–140.
13. Pantchev N, Norden N, Lorentzen L, Rossi M, Rossi U, Brand B, Dyachenko V (2009): Current surveys on the prevalence and distribution of Dirofilaria spp. in dogs in Germany. Parasitology Research 105 Suppl 1, S6–S74.
14. Reed SD, Shaw S, Evans DE (2009): Spinal lymphoma and pulmonary filariasis in a pet domestic rabbit (Oryctolagus cuniculus domesticus). Journal of Veterinary Diagnostic Investigation 21, 25–256.
15. Rishniw M, Barr SC, Simpson KW, Frongillo MF, Franz M, Dominguez Alpizar JL (2006): Discrimination between six species of canine microfilariae by a single polymerase chain reaction. Veterinary Parasitology 135, 303–314.
16. Sreter T, Szell Z (2008): Onchocercosis: a newly recognized disease in dogs. Veterinary Parasitology 151, 1–13.
17. Tanabe M, Kelly R, de Lahunta A, Duffy MS, Wade SE, Divers TJ (2007): Verminous encephalitis in a horse produced by nematodes in the family protostrongylidae. Veterinary Pathology 44, 119–122.
18. Tarello W (2003): Dermatitis associated with Dirofilaria repens microfilariae in a dog from Rome. Veterinary Journal 165, 175–177.
СВМ № 3/2014