Оценка состояния эритроцитов в мазках крови — важный этап в исследовании. При системном подходе она даёт исследователю много информации.
Микроскопия эритроцитов является дополнительным анализом при подсчёте количества клеток и формулы крови, который важно учитывать при постановке диагноза. В определённых случаях одна только оценка эритроцитов позволяет поставить конкретный диагноз.
Распределение эритроцитов оценивается в тонком слое мазка крови (таблица 1).
| Таблица 1. Исследование эритроцитов в мазках крови: оценка, распределение их размера, их формы и окраски |
||||
| Плотность | Размер | Форма | Цвет | Включения, паразиты |
| Снижение: анемия |
Макроцитоз: регенеративная анемия, лейкоз кошки и т.д. Микроцитоз: дефицит по содержанию железа, портосистемное шунтирование |
Акантоциты, шизоциты, кератоциты: гемангиосаркома, ДВС* синдром и т.д. Сфероциты: гемолиз опосредованный иммунной реакцией Эхиноциты: часто артефакт |
Гипохромия: дефицит железа |
Тельца Гейнца, эксцентроциты: окислительное повреждение Тельца Говелла-Жолли: регенеративная анемия и т.д. Паразиты: Babesia canis, Mycoplasma hoemofelis |
| *ДВС — диссеминированное внутрисосудистое свёртывание | ||||
В этой зоне клетки наиболее часто располагаются изолированно, что позволяет легко уточнить плотность их распределения. У животного с умеренной или тяжёлой анемией в сравнении со здоровым плотность распределения эритроцитов в тонком слое, как правило, чётко снижена (большое пространство между клетками) (фото 1а и 1б). В этой зоне мазка могут выявляться агглютинированные эритроциты и «монетные столбики» (фото 2 и 3).
Очень важно дифференцировать «монетные столбики» от агглютинации, потому что их значимость сильно различается. Агглютинация объясняется присутствием иммуноглобулинов (в основном IgM), связанных с поверхностью эритроцитов и преимущественно персистирующих во время гемолитической анемии, опосредованной иммунным ответом (иммунная гемолитическая анемия — ИГА) (D.J. Weiss, 2000). Образование «монетных столбиков» обычно вторично и связано с увеличением концентрации белков, в частности глобулинов, встречаемом при воспалительных процессах (инфекционном перитоните у кошки, эрлихиозе и т. д.) или при неоплазии (множественная миелома или лимфома). Для дифференциации используется солевой тест (фото 4). У кошек формирование «монетных столбиков» преимущественно физиологично, тогда как у собак оно чаще всего свидетельствует о наличии патологии.
Размер эритроцитов в мазках крови
Увеличение размера
Макроциты — эритроциты большого размера, превышающего размер зрелых эритроцитов. Макроциты, обычно с наличием полихроматофилии, обнаруживают при регенеративной анемии (вариацию объёма эритроцитов в мазках крови называют анизоцитозом).
Полихроматофилы распознают по слегка базофильному цвету, что объясняется наличием рибосом, окрашивающихся в голубой цвет (фото 5) (N.C. Lain, 1993). С практической точки зрения у собаки или кошки, страдающих анемией, независимо от степени её выраженности, обнаружение двух четвертей полихроматофилов в поле зрения микроскопа (×1000) можно считать признаком регенерации. Подсчёт ретикулоцитов (эритроциты характерной окраски при окрашивании новым метиленовым синим c присутствием агрегированных или изолированных темно-голубых включений в их цитоплазме) считается стандартным методом на определение регенеративной анемии (фото 6).
Однако в системе гемоциркуляции и здоровых собак и кошек выявляется небольшое количество этих клеток, соответствующее приблизительно одному полихроматофилу на 100–200 эритроцитов. Макроцитоз может проявляться не только при регенеративной анемии. Но в этих случаях при анизоцитозе полихроматофилии не обнаруживают. У кошек, заражённых вирусом лейкоза (FeLV), часто отмечают персистенцию вторичных макроцитов с дисэритропоэзом, который провоцируется вирусом. Это вирусное заболевание может сопровождать анемия, регенеративная или нет (в зависимости от стадии развития заболевания). Описаны случаи физиологического макроцитоза у борзых и некоторых миниатюрных пуделей (C.J. Kociba, 2000).
Снижение размеров
Микроциты (эритроциты малого размера) выявляют при анемии, вызванной дефицитом железа (алиментарный дефицит, хронические кровотечения), секвестрации железа в крови (при синдроме воспаления, впрочем, секвестрация железа часто ведёт к нормоцитарной нормохромной анемии), портосистемном шунтировании и, что наиболее странно, могут быть вариантом нормы у некоторых пород собак, таких как акита-ину (J.W. Harvey, 2000).
Форма эритроцитов в мазках крови
Сфероциты
Сфероциты — это эритроциты малого размера, которые при сравнении их в тонком слое мазка крови с другими эритроцитами имеют более интенсивную окраску без признаков просветления в центре (фото 7). Эритроциты у основания мазка крови, естественно, более плотные и без признаков просветления в центральной их части, можно спутать со сфероцитами.
У собак сфероциты, часто в сочетании с агглютинацией, обычно обнаруживают при иммунной гемолитической анемии (более чем у 80% больных собак присутствует выраженный сфероцитоз и более чем у 30% при этом отмечается агглютинация). О сфероцитозе в основном говорят, когда в поле зрения микроскопа отмечают более 20% сфероцитов.
У кошки, несмотря на то что иммунная гемолитическая анемия встречается очень редко, сфероциты трудно дифференцировать от эритроцитов, потому как, последние в центральной их части не имеют просветления.
Акантоциты
Акантоциты — эритроциты, которые при анализе их под световым микроскопом имеют плотную цитоплазму, а также неодинаковую по длине и ширине поверхность мембраны (фото 8). Их формирование может иметь вторичную природу в связи с увеличением соотношения в мембране холестерина к фосфолипидам при гиперхолестеринемии, липидозе печени или при холангиогепатите у кошек, а также в случае портосистемного шунтирования у собак. Формирование акантоцитов может также вызвать микроангиопатия, провоцирующая нарушение эритроцитов (ДВС-синдром, гемангиосаркома, гломерулонефрит и т. д.) (D.J. Weiss, 2000).
Кератоциты и шизоциты
Кератоциты — это эритроциты, которые имеют две проекции острых конвергентных (встречающихся) краёв, соединяющихся на одном конце клетки (фото 9). Шизоциты имеют сильно повреждённую структуру и появляются в мазке крови в виде фрагментов эритроцитов с острыми краями. Как и акантоциты, шизоциты наблюдают преимущественно при микроангиопатии (J.W. Harvey, 2000).
Эхиноциты
Эхиноциты — это шестерёнчатые (щетинистые) эритроциты с проецированием тонких и коротких острых кончиков одинаковой длины, распространяющихся одинаково по поверхности мембраны (фото 10). Обычно их присутствие является вторичным морфологическим артефактом, обусловленным избыточным введением ЭДТА и продолжительной экспозицией с момента забора крови до нанесения её на предметное стекло. Следовательно, присутствие эхиноцитов не является признаком какого-либо заболевания.
Так или иначе, число эхиноцитов в мазке крови может возрасти при определённых патологических состояниях, например в случае азотемии (J.W. Harvey, 2000).
Цвет эритроцитов в мазках крови
Полихроматофилы и условия их появления обусловлены регенеративной анемией.
В центре гипохромных зрелых эритроцитов в мазках крови имеется более выраженное просветление (бледность), потому что в отличие от нормы они располагают более низкой концентрацией гемоглобина (фото 11). Их присутствие ассоциируется в основном с железодефицитной анемией (например, при хронических наружных кровотечениях) (J.W. Harvey, 2000).
Нарушенные структуры и эритробласты
Нарушенные структуры. Тельца Гейнца и эксцентроциты
Тельца Гейнца (ТГ), как и эксцентроциты, образуются вследствие окислительного повреждения эритроцитов.
ТГ проявляются в виде розовой протуберанции (выступа) или бледного включения возле мембраны (фото 12). Эксцентроциты — это эритроциты уродливой формы с наличием светлой «растущей» структуры, находящейся сбоку мембраны (фото 13).
У собаки и кошки причина анемии с присутствием ТГ и эксцентроцитов имеет алиментарную природу (например, при поедании лука), а также медикаментозную (парацетамол и т. д.) или токсическую (цинк и т. д.) (M. Desnoyers, 2000; J.W. Harvey, 2000). У здоровой кошки редко встречаются эритроциты, которые могут иметь ТГ (до 5%). Их число может возрасти у больной сахарным диабетом кошки, не страдающей анемией, гипотиреоидозом и лимфомой.
Тельца Говелла-Жолли
Тельца Говелла-Жолли — это фрагменты ядер, которые не элиминировались из эритроцитов, и встречаются при регенеративной анемии или в результате проведения спленэктомии. Их также наблюдают иногда в нормальном состоянии, в основном у кошек (J.W. Harvey, 2000).
Паразиты
В эритроцитах в мазках крови можно обнаружить персистенцию паразитов. Два встречаются часто: Babesia canis у собак и Mycoplasma haemofelis (старое название: Hemobartonella felis) у кошек (фото 14 и 15). Первый имеет форму груши, часто бывает парным и при окрашивании по Романовскому-Гимзе имеет цвет от прозрачного до бледно-голубого с красным пурпурным ядром. Второй, Mycoplasma haemofelis, прикрепляется к поверхности эритроцитов, окрашивается в темно-голубой цвет (окраска по Романовскому-Гимзе) и может иметь форму кокка, кольца или палочки.
Эритробласты
Эритробласты — это ядросодержащие эритроциты, в стадии неполной зрелости. В основном они высвобождаются из костного мозга при достаточно выраженной регенерации у анемичных животных. Их появление в кровеносном русле также может указывать на нарушение костного мозга или на патологию селезёнки (фото 16) (J.W. Harvey, 2000; N.C. Jan, 1993).
Исследование эритроцитов в мазках крови позволяет дать серьёзную информацию, которая необходима для постановки диагноза. Например, выявление гипохромной анемии, которая чаще всего развивается при дефиците железа, позволяет задуматься о хроническом наружном кровотечении. Наличие акантоцитов в системе гемоциркуляции указывает на механическое повреждение эритроцитов, ассоциируемое с гемангиосаркомой, а также почечной гипертензией и т. д. Таким же образом иногда может быть поставлен окончательный диагноз. Так, регенеративная анемия в сочетании со сфероцитозом и агглютинацией, позволяет установить иммунную гемолитическую анемию.
Основные положения
— Тест на солевой раствор позволяет дифференцировать агглютинацию от образования «монетных столбиков».
— Регенеративная анемия характеризуется присутствием множества полихроматофилов в мазке крови.
— Присутствие сфероцитов и агглютинация являются характерным признаком иммунной гемолитической анемии у собак.
— Присутствие эхиноцитов часто является артефактом при подготовке мазка.
СВМ № 5/2010
Верхнее фото: Prostock-studio / AdobeStock