Оценка тромбоцитов и лейкоцитов в мазках крови

Исследование тромбоцитов и лейкоцитов в мазках крови является важнейшим этапом диагностики воспалительных нарушений и причин кровоточивости.

Помимо оценки эритроцитов обследование мазков крови подразумевает наличие тромбоцитов и лейкоцитов в основном для определения незрелых нейтрофилов, выявления токсических и лимфоцитарных реакций. Исследование тромбоцитов и лейкоцитов в мазках крови является важнейшим этапом диагностики воспалительных нарушений и причин кровоточивости.

Оценка тромбоцитов

Оценка тромбоцитов путём подсчёта показана, в частности, когда клиническая картина указывает на возможную тромбоцитопению (петехии, экхимозы — обширные кровоизлияния под кожей или слизистой; мелена; эпистахис — носовое кровотечение; гематурия и т.д.). Если функция тромбоцитов не нарушена, геморрагические проявления возникают обычно при снижении тромбоцитов до 25–50×10⁹/л. Впрочем, даже такое снижение у некоторых животных не приводит к геморрагическому синдрому. Это можно объяснить наличием тромбоцитов наиболее крупного размера или возрастанием их активности. Первый этап проявляется в проверке на наличие сгустков, которые формируются в основном на конце мазка. У здорового животного подсчёт тромбоцитов с помощью гематологического анализатора иногда ошибочно даёт заниженный результат по причине образования крупных сгустков, поэтому возникает необходимость использования мазков крови для пересчёта. Формирование тромбоцитарных сгустков может быть следствием трудного забора крови и недостаточно быстрого переноса материала в пробирку с ЭДТА. Они могут быть также обусловлены плохой гомогенизацией материала, помещённого в пробирку (K.E. Russel, C.B. Grindem, 2000). Но у кошки тромбоциты имеют тенденцию формировать сгустки, что и провоцирует часто ошибочное представление о снижении их во время под счёта (C. Tasker, P.J. Gripps, A.J. Maskin, 1999). И наконец, при аппаратном подсчёте агрегированные тромбоциты иногда ошибочно распознаются как лейкоциты, что искажает результаты исследования.

У собаки и кошки число тромбоцитов, наблюдаемых в поле зрения микроскопа с большим увеличением (×1000), колеблется в среднем от 10 до 30 клеток. При умножении на 15×10⁹ или 20×10⁹ число клеток соответствует содержанию в 1 л (J.W. Harvey, 2001). У животного с иммунной тромбоцитопенией количество тромбоцитов в поле зрения микроскопа обычно уменьшено (фото 1а и 1б).

1а	1б
Фото 1а и 1б. Подсчёт мазков крови с помощью микроскопии (х1000). Отсутствие тромбоцитов у собаки с тромбоцитопенией, опосредованной иммунной реакцией 1б, сравнение со здоровой собакой 1а.

Снижение количества тромбоцитов в мазке крови при отсутствии сгустков ориентирует врача на избыточное периферическое поглощение (геморрагии, диссеминированное внутрисосудистое свёртывание — ДВС-синдром и т.д.), нарушение формирования в костном мозге или деструкцию, опосредованную иммунной реакцией (рисунок 1) (S.L. Stockman, M.A. Scott, 2008).

Рисунок 1. Основные причины развития тромбоцитопении,
рассматриваемой после окончательного подтверждения с помощью мазков крови

Оценка лейкоцитов в мазках крови

Исследование морфологии лейкоцитов в мазках крови может дать нам серьёзную информацию. Большое количество гематологических анализаторов даёт общее число лейкоцитов и осуществляет дифференциацию (процент по отношению к общему числу лейкоцитов) в трёх или пяти частях (нейтрофилы, моноциты, лимфоциты, эозинофилы и базофилы). Тем не менее как и для эритроцитов и тромбоцитов, эти современные методы диагностики нередко дают искажённую или неполную информацию по морфологии лейкоцитов, что требует также дополнительного исследования мазка крови.

Нейтрофилы

Незрелые нейтрофилы

При выраженном воспалительном очаге (пиометра, бронхопневмония и т. д.) в периферической крови часто появляются незрелые формы лейкоцитов. На это указывает сдвиг лейкоцитарной формулы влево. Такая картина связана с выраженной потребностью тканей организма в нейтрофилах, при том, что пул зрелых нейтрофилов в костном мозге истощён.

Степень отклонения влево проявляется количеством незрелых нейтрофилов и их уровнем зрелости. Чаще всего сдвиг влево проявляется в увеличении количества несегментированных (палочкоядерных) нейтрофилов (клетки с полосками) (фото 2). При наличии более выраженного очага воспаления иногда наблюдают наличие мета- и миелоцитов (фото 3). Длительное сохранение выраженного отклонения влево, особенно в сочетании с нейтропенией, (дегенеративные отклонения влево) рассматривают как индикатор неблагоприятного прогноза. Иногда несегментированные нейтрофилы можно наблюдать и у здоровых животных.

Фото 2. Считывание мазков крови с помощью микроскопии (х1000) у собаки, подверженной острой бронхопневмонии. Присутствие незрелого несегментированного нейтрофила (клетка с полоской) с признаками токсичности (гетерогенная и базофильная цитоплазма)	Фото 3. Считывание мазка крови под микроскопом (×1000) у собаки с пиометрой. Присутствие миелоцита с признаками токсичности (гетерогенная и базофильная цитоплазма)

Токсические изменения

К токсическим изменениям в нейтрофилах относят появление телец Дойла, а также цитоплазматической базофилии, диффузной цитоплазматической вакуолизации и лизиса ядра (J.W. Harvey, 2001). Наличие токсической грануляции (розовые гранулы обычно отсутствуют в зрелых нейтрофилах) также является индикатором токсичности.

Тельца Дойла — это скопление шероховатой формы эндоплазматического ретикулума, образующее голубоватые гранулы. Обнаружение нескольких нейтрофилов с тельцами Дойла у кошки рассматривают как норму (фото 4).

Базофилия цитоплазмы связана с большим количеством шероховатого и полирибосомного ретикулума. Диффузная вакуолизация и лизис ядра проявляются в последнюю очередь, при выраженной токсемии. Обычно изменение степени токсичности сопровождает сдвиг лейкоцитарной формулы влево.

Лимфоциты

Реакционные лимфоциты

Случайно появившиеся реакционные (или реактивные) лейкоциты в мазках крови можно наблюдать при стимуляции антигеном (например, во время вакцинации). Часто эти клетки более крупного размера с базофильной и наиболее обильной цитоплазмой по отношению к малым нормальным лимфоцитам. Хроматин более или менее хорошо конденсированный и нуклеолы в основном не визуализируются (фото 5).

Большие гранулёзные лимфоциты

Большие гранулематозные лимфоциты в отличие

от малых нормальных лимфоцитов имеют бледную, более обильную цитоплазму и содержат пурпурные гранулы (фото 6).

Эти клетки относятся к Т-лимфоцитам или естественным киллерам (иммунологические маркёры CD8+). Их число возрастает при инфицировании Ehrlichia canis и при хроническом лимфолейкозе (J.W. Harvey, 2001).

Атипичные лимфоциты и лимфобласты

Атипичные лимфоциты и лимфобласты значительно крупнее нормальных лимфоцитов. Хроматин в их ядрах с чётко выраженной и слабо концентрированной грануляцией. В лимфобластах, помимо вышесказанного, содержатся выступающие нуклеолы (фото 7). В малом количестве их наличие может быть вызвано воспалением. Возрастание их числа может сигнализировать об остром лимфобластном лейкозе или лимфоме пятой стадии (лимфома с инфильтрацией костного мозга через неопластические лимфоциты). Морфологически лимфобласты бывает трудно дифференцировать от бластов, проявляющихся от других линий клеток, например от миелобластов. Для окончательной идентификации используются современные иммуноцитохимические методы и специфические цитохимические окраски (непосредственно на мазках) (J.A. Ramos-Vara, A.C. Avery, P.R. Avery, 2010).

Фото 7. Считывание мазков крови под микроскопом (×1000) у собаки, подверженной острой лимфоидной лейкемии. Отмечается наличие лимфобластов с выступающими нуклеолами и гранулярным хроматином со слабой конденсацией	Фото 8. Считывание мазка крови под микроскопом (×1000) у собаки. Визуализируется морула Еhrlichia spp. (стрелочка), наблюдаемая в зрелом нейтрофиле

Включения

В лейкоцитах можно обнаружить микроорганизмы, как, например, Ehrlichia spp., представленная морулой в моноцитах или гранулоцитах (фото 8).

Мастоциты (тучные клетки)

Мастоциты идентифицируют обычно на концевой и краевой частях мазка. Их можно отличить от базофилов по круглому ядру и большому количеству тёмных вкраплений в виде гранул, способных маскировать ядро. Мастоциты встречаются при воспалении (гиперсенсибилизация), а также при неопластических процессах (системная мастоцитома).

Исследование тромбоцитов и лейкоцитов в мазке крови позволяет быстро диагностировать целый ряд заболеваний, таких как тромбоцитопения или гемопоэтическая неоплазия (например, острый лимфобластный лейкоз). В некоторых случаях своевременная постановка окончательного диагноза существенно улучшает прогноз и быстро ориентирует в выборе терапии. Кроме того, это позволяет оценить тяжесть очага воспаления или уточнить прогноз для животного, находящегося в критическом состоянии.

Основные положения

— При отсутствии нарушений функции тромбоцитов геморрагический синдром проявляется при снижении тромбоцитов до 25–50×10⁹/л.
— При выраженном воспалении в мазках крови всегда обнаруживаются незрелые нейтрофилы.
— У кошек наличие нескольких нейтрофилов с тельцами Дойла соответствует норме.
— Атипичные лимфоциты и лимфобласты встречаются в большом количестве при остром лимфобластном лейкозе и лимфоме в пятой стадии.
— При эрлихиозе собак морула Еhrlichia spp. может персистировать в моноцитах или гранулоцитах.

СВМ № 5/2010
Верхнее фото: Freepik