Диффузная меланома радужки кошек: текущее понимание проблемы и данные последних исследований

Введение

Средний возраст пациентов, страдающих диффузной меланомой радужки кошек (ДМРК), составляет 9,4 года [1] с зарегистрированным диапазоном от 2 до 23,1 года [2; 3; 4; 5; 6]. ДМРК начинается с гиперпигментированных очагов, состоящих из популяции диспластических меланоцитов, в виде плоских коричневых пятен на поверхности радужной оболочки. Диспластические признаки меланоцитов были определены Featherstone et al. (2019) как крупные, пигментированные меланоциты с различной степенью анизокариоза с гиперхромазией или без неё и/или с выраженными ядрышками [5]. Эти поражения-предшественники считаются доброкачественными и известны как меланоз радужной оболочки, при котором меланоциты расположены только в передней части радужной оболочки в 1–3 слоях, независимо от степени атипии меланоцитов. Поведение этих поражений непредсказуемо. Некоторые из них остаются статичными или медленно растут в течение нескольких месяцев или лет, что приводит только к косметическим изменениям радужной оболочки. Другие могут быстро прогрессировать [2]. Переход меланоза радужной оболочки в раннюю ДМРК определяется только при гистологическом исследовании, когда подтверждается инвазия диспластических меланоцитов в строму радужной оболочки [7].

Амеланотические варианты встречаются нечасто и клинически могут быть ошибочно приняты за воспалительные изменения [8; 9]. ДМРК постепенно прорастает радужную оболочку, иридокорнеальный угол и цилиарное тело, в конечном итоге проникая в склеру. Утолщение радужной оболочки, дискория и снижение моторики зрачка, а также вторичная глаукома могут возникать вторично по отношению к инфильтрации новообразованием иридокорнеального угла. Клетки новообразования могут попадать в переднюю камеру, их распространение через жидкость является предполагаемым путём метастазирования [9]. Экстраокулярное метастазирование, скорее всего, происходит по гематогенному пути через склеральное венозное сплетение. Для возможности лимфогенного пути метастазирования склера должна быть инфильтрирована неопластическими клетками, так как глаз лишён интраокулярных лимфатических сосудов [8]. Метастазы чаще всего возникают в печени, а также в лёгких, почках, селезёнке, лимфатических узлах, головном мозге и костях [1; 2; 3; 4; 8; 10; 11]. Сообщалось о латентном периоде в несколько лет между диагнозом ДМРК и смертью от метастатического заболевания [2; 3; 4]. Между исследованиями наблюдаются большие различия в упоминаемой частоте метастазирования, от 19% до 63% [3; 4]. После энуклеации возможно локальное рецедивирование опухоли в области орбиты. [1].

Увеит и разрыв капсулы хрусталика также были описаны как обнаруженные сочетанные патологии [2; 4; 8; 12]. Энуклеация является стандартным методом лечения ДМРК, данные о хирургической иридэктомии или фотокоагуляции с использованием Nd: YAG лазера отсутствуют [10]. Эти методы лечения не рекомендуются при ДМРК из-за высокого метастатического потенциала и диффузного характера заболевания [13].

Показано, что экспериментальное внутрикамерное введение вируса саркомы кошек (FeSV) котятам индуцирует образование злокачественной меланомы радужной оболочки и цилиарного тела [14]. Наличие естественного вируса лейкемии кошек (FeLV) и вируса саркомы кошек (FeSV) было позже исследовано Stiles et al.; исследование методом вложенной полимеразной цепной реакции (ПЦР) проводили на депарафинизированных срезах 36 глазных яблок с ДМРК (фиксированные в формалине парафинизированные образцы). В ходе исследования было выявлено, что 3 из 36 образцов были положительными по FeLV-FeSV [15]. В другом исследовании Cullen et al. не удалось идентифицировать FeLV-FeSV при исследовании методом ПЦР и иммуногистохимическом исследовании (ИГХ) 10 глазных яблок с ДМРК (фиксированные в формалине парафинизированные образцы) [16].

ДМРК имеет тенденцию ограничиваться передней частью сосудистой оболочки, не инвазируя заднюю часть сосудистой оболочки глаза. Напротив, атипичная меланома кошек возникает из любой части сосудистой оболочки глаза, кроме передней части радужки. Как следует из названия, это редкая патология, составляющая всего 1% новообразований кошек, по данным Лаборатории сравнительной патологии глаза штата Висконсин (COPLOW) [1]. Характерным признаком атипичной меланомы является агрегация клеток в субретинальном пространстве [1]. Новообразование часто выявляется уже после того, как произошла значительная инфильтрация тканей глаза, так как изначально оно поражает задний сегмент [17]. Гистологически клетки имеют однородную морфологию, они округлые с выраженной пигментацией и небольшими круглыми ядрышками. Неопластические клетки на поздних стадиях ДМРК, напротив, лишь слегка пигментированные с выраженными признаками атипии. Атипичная меланома обладает метастатическим потенциалом, несмотря на относительно дифференцированную морфологию клеток [1; 17]. Сообщалось о единичном случае первичной меланоцитомы хориоидеи у кошки [18] и меланомы [19]. Также документирован единичный случай беспигментной меланомы радужной оболочки субатрофированного глазного яблока у 13-летней самки домашней короткошёрстной кошки [20].

Диагностика

Клинические признаки

Кошки с гиперпигментацией радужной оболочки должны пройти полное офтальмологическое обследование. Биомикроскопия, гониоскопия и непрямая офтальмоскопия необходимы для оценки степени поражения, а также выявления любых потенциальных признаков злокачественности. Поскольку диспластические меланоциты сначала проникают в строму радужной оболочки и становятся ранней ДМРК, при офтальмологическом осмотре поражения изначально неотличимы от меланоза радужной оболочки (илл. 1) [2; 5]. Однако по мере прогрессирования ДМРК инфильтрация стромы радужной оболочки приводит к явным изменениям, таким как утолщение радужки, дискория, снижение мобильности зрачка, взвесь пигмента в передней камере глаза и инвазия в иридокорнеальный угол [10].

 

Измерение внутриглазного давления следует проводить из-за риска вторичной глаукомы при инфильтрации новообразованием иридокорнеального угла. ДМРК является важным дифференциальным диагнозом для кошек с односторонней глаукомой. На илл. 2 изображён глаз 12-летней домашней короткошёрстной кошки, которая поступила в клинику с односторонней глаукомой. Последующая энуклеация с гистопатологическим исследованием подтвердила, что причиной являлась ДМРК.

 

При медленно прогрессирующих поражениях или незначительных изменениях рекомендуются регулярные и частые повторные обследования и тщательная фотофиксация состояния [10].

Сильно пигментированные иридоцилиарные кисты можно принять за меланоцитарное новообразование. Fragola et al. сообщили о серии случаев (14 глазных яблок), которые были ошибочно энуклеированы на основании подозрения на неоплазию: все 14 глаз содержали одну или несколько иридоцилиарных кист, но не содержали опухолевых клеток. Из этих глазных яблок 8 были энуклеированы при подозрении на меланоцитарную неоплазию. Большинство (n = 9) глаз были энуклеированы по рекомендации сертифицированных ветеринарных офтальмологов. В половине случаев было подозрение на неоплазию радужной оболочки (n = 7) [21].

Иридоцилиарные кисты могут появляться в зрачке и происходят из заднего эпителия радужной оболочки. В большинстве случаев они — случайная находка, не вызывающая клинических признаков [22]. Иридоцилиарные кисты могут привести к дискории, а также могут возникать в контралатеральном глазу.

Ультразвуковое исследование глаза может помочь дифференцировать меланоцитарное объёмное образование и толстостенные, сильно пигментированные иридоцилиарные кисты. УЗИ также может помочь определить распространение новообразования глаза [13].

Современные методы визуальной диагностики, такие как компьютерная томография (КТ) или магнитно-резонансная томография (МРТ), также рекомендуются при подозрении на ДМРК, чтобы выявить инвазию периорбитальных костных структур, а также как инструменты скрининга на наличие метастатических поражений [13].

Биопсия радужной оболочки

Поскольку для дифференциации ранней ДМРК от меланоза радужной оболочки требуется гистологическое исследование, надлежащее ведение кошек с гиперпигментированными поражениями радужки может быть серьёзной проблемой для клиницистов. Биопсия радужки была описана как полезный диагностический метод для дифференциации ранней ДМРК и меланоза с целью обоснования проведения ранней энуклеации в случае подтверждения ДМРК по биопсии [5].

Featherstone et al. (2019) описали технику и осложнения биопсии радужки в ретроспективном обзоре 7 случаев, в которых процедура была выполнена с использованием общей анестезии и нервно-мышечной блокады. От 1 до 6 биоптатов были взяты из каждой радужной оболочки, в 4 из 7 случаев образец захватывал радужку не на полную толщину, в 3 — на полную. Были выявлены лишь незначительные осложнения, включая лёгкое, самокупирующееся кровоизлияние в радужную оболочку (n = 4), образование фибринового сгустка в передней камере (n = 2), псевдополикорию (n = 2), изъязвление роговицы (n = 1) и дискорию (n = 1). Послеоперационная офтальмогипертензия возникла на обоих глазах у одной кошки, которая перенесла одновременно с биопсией радужки факоэмульсификацию. В 2 случаях по данным биопсии была диагностирована ДМРК, и глазные яблоки были удалены. Гистопатологическое исследование энуклеированных глазных яблок подтвердило ДМРК в обоих случаях [5].

Гистологическая оценка

Морфологических характеристик обычно достаточно для диагностики увеальных меланом кошек. Гистологические показатели злокачественности меланоцитов включают увеличение количества митотических фигур, более высокое ядерно-цитоплазматическое соотношение и увеличение ядерного плеоморфизма (включая мононуклеарный гигантизм и многоядерность). Однако для этих критериев не существует чёткого порогового значения.

ДМРК начинается как скопление небольших угловатых пигментированных клеток на передней поверхности радужной оболочки. Эти поражения-предшественники считаются доброкачественными независимо от количества проявленных диспластических признаков [5]. Они считаются злокачественными только тогда, когда диспластические меланоциты начинают проникать в строму радужной оболочки. Это может совпадать со сдвигом морфологии клеток от небольших угловатых клеток к округлым клеткам с круглым ядром и выраженным ядрышком [7]. На илл. 3 представлена серия гистологических срезов, демонстрирующих особенности дисплазии меланоцитов, а также инвазия стромы радужной оболочки неопластическими меланоцитами.

 

ДМРК демонстрирует широкий спектр клеточной морфологии, включая круглые, полигональные, веретенообразные, баллонные клетки, анапластические варианты и типы гигантских клеток [8]. Не существует корреляции между метастазированием и клеточной морфологией или наличием баллонных клеток [7]. В сильно пигментированных образцах для выявления цитологических деталей, митозов и ядерной атипии может потребоваться обесцвечивание меланина [23].

Внутриглазные меланомы могут иметь эпителиальные, круглоклеточные и мезенхимальные характеристики, что затрудняет морфологическую диагностику слабо пигментированных вариантов [1; 13]. На илл. 4 показан макроскопический вид амеланотического варианта по сравнению с более распространённым пигментированным вариантом.

 

Низкодифференцированная ДМРК может быть ошибочно принята за плеоморфную лимфому, гистиоцитарную саркому или анапластическую метастатическую карциному [23]. Иммуноокрашивание S-100, Melan-A, тирозиназным белком-2 (TRP-2), меланосомоспецифическим антигеном-1 человека (HMSA-1) и HMSA-5 может помочь в диагностике слабо пигментированных меланом глаз кошек [12; 13; 23; 24]. Использование окрашивания PNL2 также было описано, но оно связано со степенью пигментации, и его применение при слабопигментированных меланомах глаз у кошек ещё предстоит исследовать [25]. Однако все красители имеют различную чувствительность и специфичность, поэтому для подтверждения диагноза меланоцитарной неоплазии следует использовать несколько маркеров [13]. Grahn et al. (2006) обнаружили 12% несоответствие между морфологическим диагнозом при внутриглазных новообразованиях кошек и диагнозом, основанным на гистохимическом окрашивании и иммуногистохимической маркировке. Авторами был разработан алгоритм диагностики первичных и метастатических внутриглазных новообразований у кошек. Для постановки диагноза «меланома» образцы должны были окрашиваться положительно виментином и отрицательно периодической кислотой Шиффа (PAS). Кроме того, образцы должны были быть либо положительны по S-100 и тирозиназе, либо положительными по HMSA5 и отрицательными по CD3 и LY5 [12].

Факторы, связанные с метастазированием

Гистологические и морфологические характеристики

Ранние сообщения о ДМРК отражают высокую частоту метастазирования. Patnaik и Mooney (1988) изучили 16 кошек с гистопатологическим диагнозом ДМРК, установленным при исследовании энуклеированных глазных яблок. Последующая информация была доступна для 14 кошек. Метастазы были обнаружены у 63% кошек и подтверждены при патологоанатомическом и гистопатологическом исследовании. Во всех 16 случаях наблюдалась тяжёлая неопластическая инфильтрация глазных яблок. В 6 случаях новообразование поражало радужную оболочку и цилиарное тело; в 4 — «распространялось на склеру, роговицу, камеры глаза и за их пределы», а ещё в 4 — «всё глазное яблоко было замещено новообразованием» [3]. В этом исследовании наблюдалась высокая частота метастазирования, но многие глазные яблоки имели явное тяжёлое неопластическое поражение на момент энуклеации.

С тех пор сообщалось о нескольких гистологических характеристиках, связанных с частотой метастазирования. Kalishman et al. (1998) показали, что степень распространения новообразования в значительной мере связана со временем выживания. В их исследовании случаи были классифицированы на «ранние», «умеренные» и «тяжёлые». В «ранних» случаях (n = 9) новообразование было ограничено радужной оболочкой и трабекулярной сетью. В случаях этой категории время выживания пациентов было сопоставимо с контрольной группой. «Умеренные» случаи (n = 12) определялись как новообразование в радужной оболочке, ростральной части цилиарного тела, но не в склере. В «тяжёлых» случаях (n = 13) новообразование распространялось по всему цилиарному телу, а также в склеру. Увеличение степени распространённости новообразования было в значительной степени связано с уменьшением времени выживания после поправки на возраст (p = 0,007). Эти данные послужили определённым аргументом в пользу ранней энуклеации при ДМРК. Однако в исследовании в большинстве случаев отсутствовали данные о причине смерти пациента. Метастатическая болезнь считалась причиной смерти на основании потери веса в анамнезе или пальпируемого объёмного образования в брюшной полости [2].

В более поздней работе Wiggans et al. были проанализированы данные 47 энуклеированных глаз с ДМРК и выявлена прогностическая ценность различных гистологических и иммуногистохимических характеристик. Гистологический анализ сопровождался иммуномаркированием срезов против мелана-А, В-Raf, PNL2 и эпителиального кадгерина (Е-кадгерина) [4]. Исследование подтвердило предыдущие выводы о том, что локальная неопластическая инвазия связана с повышенной скоростью метастазирования. Значимыми факторами риска метастазирования являются экстрасклеральное распространение (p = 0,039), хориоидальная инвазия (p = 0,045) и некроз внутри новообразования (p = 0,026) [4]. Исследование также подтвердило предыдущие выводы о связи между высоким митотическим индексом и худшим прогнозом [8]: пороговое значение >7 митозов в поле зрения при большом увеличении было связано с повышенной частотой метастазирования (p = 0,024). В отличие от предыдущих, это исследование не выявило связи между инвазией склерального венозного сплетения и частотой метастазирования. Не было выявлено и связи между морфологией клеток и скоростью метастазирования. Большинство новообразований имело смешанную морфологию в виде эпителиоидно-веретенообразных клеток (n = 31), только эпителиоидных клеток (n = 16) и наличие баллонных клеток (n = 12). Метастатическое заболевание было заподозрено у 9/47 (19%) кошек: в 7/9 случаях на основании новообразований, выявленных на УЗИ брюшной полости (n = 6) и рентгенограммах грудной клетки (n = 1); в двух случаях метастазы были гистопатологически подтверждены при патологоанатомическом вскрытии [4].

Иммуногистохимические маркеры

Wiggans et al. обнаружили, что повышенная частота метастазов была связана с увеличением интенсивности маркеров E-кадгерина (p = 0,036) и мeлана-A (p = 0,023). Низкая частота метастазов была связано с повышенной однородностью маркера PNL2 (p = 0,008). Исследование также показало, что B-Raf постоянно экспрессируется клетками ДМРК, но не нормальными меланоцитами [4].

Мелан-А является антигеном, экспрессируемым нормальными меланоцитами, и было обнаружено, что его повышенная экспрессия связана с увеличением времени выживания у людей. Исследования на людях показали, что паттерны экспрессии различаются между кожными и глазными меланомами. Увеальные меланомы показали гомогенную экспрессию, а 17% кожных меланом не имели экспрессии [26]. Мелан-А распознаётся Т-лимфоцитами [27] и поэтому является потенциальной мишенью для иммунотерапии.

Меланоциты образуют адгезивные и регуляторные соединения с соседними клетками через трансмембранные белки E-кадгерина [28]. Снижение экспрессии связано с увеличением частоты метастазов при меланоме кожи человека, а также при других неоплазиях [29]. Напротив, апрегуляция при увеальной меланоцитарной неоплазии у человека и собак была связана с повышенным риском метастазирования [30; 31]. Поведение ДМРК скорее имитирует поведение увеальных меланом, чем кожных, у этих видов [4; 30; 31].

B-Raf является продуктом онкогена серин/треонинкиназы (BRAF) с разнообразием функциональных мутаций, выявляемых при увеальных меланомах человека [4].

Циркулирующая бесклеточная ДНК (cfDNA)

cfDNA представляет собой неинкапсулированную ДНК, которая попадает в кровоток после апоптоза или некроза клеток. Было показано, что уровни cfDNA имеют диагностическое и прогностическое значение у людей и собак с раком и другими патологиями [32].

Rushton et al. (2019) показали, что бесклеточная ДНК (cfDNA) не используется в качестве диагностического или прогностического инструмента при ДМРК. Не было выявлено существенных различий в концентрации или индексе целостности cfDNA (p > 0,01) между кошками с меланомой радужной оболочки (n = 34), с невусами радужки (n = 30) и контрольными группами без меланоцитарных аномалий радужки (n = 32) [33].

Исследование, возможно, было ограничено из-за небольшого количества cfDNA, выделенного из плазмы кошек по сравнению с людьми, из-за относительно небольшого объёма полученной плазмы. Только 24 глазных яблока, энуклеированных после подозрения на ДМРК, были подвергнуты гистологическому исследованию. Другие случаи были диагностированы только на основании клинического обследования, и, следовательно, результаты могли быть неправильно интерпретированы. Исследование показало, что отсутствие нарушений целостности гематоофтальмического барьера во всех случаях ДМРК, кроме чрезвычайно запущенных, может препятствовать попаданию значительных уровней cfDNA в системный кровоток. Было показано, что у людей с ретинобластомой образцы водянистой влаги демонстрируют большее количество cfDNA, выделяемой новообразованием, по сравнению с пробой крови [34]. cfDNA обнаруживалась в водянистой влаге в связи с терапевтическим ответом ретинобластомы. Прогрессирование новообразования ассоциировалось с повышенной опухолевой фракцией (TFx) (доля cfDNA, выделенной новообразованием) и изменениями числа соматических копий (SCNA) (p ≤ 0,04) [35].

Необходимо дальнейшее исследование наличия cfDNA в водянистой влаге кошек с меланомой глаза [33].

Роль инфильтрирующих опухоль лимфоцитов (TIL)

TIL — это иммунные клетки хозяина, направленные против неопластических клеток. Их наличие было связано с более благоприятным прогнозом при меланомах. Многочисленные исследования также показали их значимость в качестве терапевтических мишеней и ответа на иммунотерапию рака [36].

В предварительном отчёте Porcellato et al. исследовалась связь между TIL и иммуногистохимическими маркерами и гистологическими особенностями. Было проанализировано 36 случаев меланомы у кошек [25]. Из них 12 были меланомами глаз, 18 — меланомами кожи (2 из которых были меланоцитомами) и 8 — меланомами полости рта. Гистологическую оценку проводили перед иммуногистохимическим окрашиванием антителами к S100, мелану-А и PNL2 для подтверждения гистологического диагноза. Пробы, положительные на S100 и либо мелан-A, либо PNL2, подтверждались как меланоцитарные новообразования и включались в исследование. Оценка наличия, распределения и плотности TIL проводилась до того, как образцы подверглись иммуногистохимическому окрашиванию маркерами поликлональных антител CD20 кролика и CD3. Было показано, что TIL часто встречаются в меланоцитарных новообразованиях у кошек. Более высокие степени TIL ассоциировались с более низкой экспрессией мелана-A и PNL2 (p < 0,05) и процентом некроза при меланоцитарных новообразованиях глаза [36]. Результаты демонстрируют, что TIL могут быть связаны с гистологическими признаками злокачественности и потерей экспрессии мелана-A и PNL2.

Вторичная глаукома

Kalishman et al. обнаружили, что вторичная глаукома является отрицательным прогностическим показателем выживаемости у кошек с ДМРК. Однако скорректированное по возрасту влияние глаукомы на выживаемость не было статистически значимым (p = 0,07) [5]. Более поздние исследования Wiggans et al. не обнаружили статистически значимой связи между наличием вторичной глаукомы и метастазированием (p = 0,36) [7].

Экспрессия генов и мутационный анализ

Rushton et al. (2017) провели пилотное исследование генетического ландшафта меланомы глаза, изучив возможные мутации генов, а также статус экспрессии генов, наиболее часто участвующих в инициации и прогрессировании увеальных меланом у людей и собак. Секвенирование ДНК (n = 10) и уровни экспрессии РНК (n = 10) измеряли с помощью количественной полимеразной цепной реакции в реальном времени (кПЦР) в 12 образцах меланомы глаза (11 меланом радужки и 1 меланома конъюнктивы) [37].

Секвенирование ДНК проводили с помощью праймеров полимеразной цепной реакции (ПЦР) для наиболее часто идентифицируемых мутаций, выявленных в меланомах кожи и увеальных меланомах человека (BRAFV600E, GNAQQ209, GNAQR183, GNA11Q209, NRASG12/13, NRASQ61, KITW557, KITK642, KITD816 и MEK1I111). Эти мутации не были идентифицированы в образцах меланомы кошек [37].

Анализ экспрессии РНК проводили на генах GNAQ, GNA11, BRAF, KIT, NRAS, BAP1, FXR1, LTA4H, RASSF1 и CDH1. Было выявлено достоверное (p < 0,05) повышение экспрессии KIT и LTA4H и понижение — GNAQ, GNA11, BRAF и RASSF1 [37].

Rushton et al. развили свою предыдущую работу, измерив экспрессию белка в ранее изученных областях горячих точек генетических мутаций. Экспрессия KIT, BRAF, GNA11, GNAQ и RASSF1 была проанализирована в 57 фиксированных в формалине парафинизированных (ФФП) глазных яблоках с гистологически подтверждённой меланомой радужной оболочки и в контрольной группе из 25 ФФП глазных яблок, которые не имели глазных аномалий. ФФП срезы окрашивали антителами, специфичными к исследуемым белкам, с помощью иммунофлюоресценции. Глазные яблоки с ДМРК показали повышенную экспрессию KIT, BRAF, GNAQ и GNA11 (p < 0,05) [38].

BRAF представляет собой протоонкоген (кодирующий белок B-Raf), который активирует путь митоген-активируемых протеинкиназ/регулируемых внеклеточным сигналом киназ (MAPK/ERK) [39]. Сообщалось, что мутации в BRAF встречаются в 66% меланом человека [40]. GNAQ и GNA11 играют различные роли в нормальном клеточном цикле, синтезе ДНК и экстравазации опухоли, как показали исследования на людях и мышах [29; 30; 31]. KIT кодирует белки рецепторной тирозинкиназы, которые играют ключевую роль в передаче клеточного сигнала, а также в функционировании и развитии многих типов клеток, включая меланоциты [41; 42; 43]. Гиперэкспрессия KIT была выявлена при увеальных меланомах человека [44].

Исследование выявило, что ДМРК демонстрирует повышенную экспрессию белков, которые, как было показано ранее, играют ключевую роль в пути прогрессирования новообразования у людей (KIT, BRAF, GNAQ и GNA11). При этом исследование потенциально выявило несколько возможных химиотерапевтических целей. Ингибиторы B-Raf исследуются в качестве дополнительных химиотерапевтических агентов [7]. Наиболее значимым результатом исследования является идентификация сверхэкспрессии KIT в образцах с ДМРК. Показано, что ксенотрансплантаты и клеточные линии меланомы человека с гиперэкспрессией KIT обладают высокой чувствительностью к химиотерапевтическому препарату иматинибу (ингибитору тирозинкиназы) [45]. Обнаруженная сверхэкспрессия KIT при ДМРК может оказаться фундаментальным этапом в разработке адъювантной терапии для запущенных случаев этого новообразования.

Однако повышенная экспрессия белков BRAF, GNAQ и GNA11, выявленная при иммунофлуоресценции, не подтверждает предыдущее пилотное исследование Rushton et al. (2017), которое показало снижение экспрессии мРНК этих генов [37; 38]. Автор выдвигает гипотезу о том, что в наблюдаемых различиях могут быть задействованы сложные посттранскрипционные механизмы; или что могли возникнуть потенциальные ошибки при обнаружении или подсчёте мРНК или белка с использованием кПЦР и ИГХ [38]. Необходимы дальнейшие исследования, чтобы подтвердить результаты этого исследования и понять, почему существуют различия в экспрессии мРНК и белка для BRAF, GNAQ и GNA11.

Адъювантная терапия

На сегодняшний день не существует признанных адъювантных методов лечения ДМРК [37]. Ксеногенная ДНК-вакцина против тирозиназы человека (Oncept®) была разработана для использования при оральной меланоме собак [46]. Было показано, что вакцина улучшает ожидаемое время выживания собак со злокачественной меланомой [47; 48] и что вакцина против меланомы собак (Oncept®) безопасна для кошек с минимальным риском побочных эффектов [49]. Однако нет данных о влиянии вакцинации на ожидаемое время выживания кошек с меланоцитарной неоплазией. Требуется дальнейшее изучение использования вакцины в качестве адъювантной терапии у кошек.

Данные о частоте метастазирования относительно скудны и ограничены по нескольким причинам. Случаи, включённые в ранние исследования Patnaik, A.K. и Mooney, были чрезвычайно запущены к моменту энуклеации, что смещало данные в сторону высокой частоты метастазирования [6]. Количество случаев также было сильно ограничено. В более поздних исследованиях метастазы зачастую не подтверждались гистологически или цитологически как вторичные очаги по отношению именно к ДМРК [5; 7]. Метастатическое заболевание предполагалось на основании анамнеза или данных о новообразовании при УЗИ/рентгене брюшной полости или грудной клетки. Эти исследования могут ошибочно завышать истинную частоту метастазирования при ДМРК. Данные, предоставленные Kalishman et al. (1998), указывающие на то, что ранняя энуклеация привела к улучшению исхода, дают клиницистам основание проводить энуклеацию зрячих и безболезненных глаз [5]. Эта информация основана на данных только 9 кошек с ранней ДМРК. Энуклеация зрячего и безболезненного глаза является сложным решением для любого владельца домашнего животного. Важна точная информация о рисках метастатического заболевания и вероятном влиянии на выживаемость поражённых кошек. Только после того, как будет получена точная информация, владельцы смогут принять действительно обоснованное решение о том, стоит ли проводить энуклеацию.

Биопсия радужной оболочки глаза предоставляет клиницисту полезный диагностический инструмент, который может помочь выявить случаи ранней ДМРК. В случае получения результата биопсии «меланоз радужной оболочки» следует сохранять настороженность по двум причинам. Во-первых, образец может не быть репрезентативным для всей ткани радужки. Во-вторых, меланоз радужной оболочки может позже трансформироваться в ДМРК, и повторная биопсия может быть рекомендована, если поражения продолжат прогрессировать. Утверждённые прогностические иммуногистохимические маркеры, такие как описанные Wiggans et al. (2016), могут быть применены к инцизионной биопсии радужной оболочки и, возможно, к её аспиратам и образцам внутриглазной жидкости [7; 9]. Это значительно увеличит диагностическую ценность биопсии радужной оболочки.

Featherstone et al. (2019) также обсуждают неточную номенклатуру, связанную с меланозом радужной оболочки. В настоящее время термин «меланоз радужной оболочки» учитывает только расположение меланоцитарных клеток в передней части радужки, независимо от степени атипии. Вполне вероятно, что меланоцитарные клетки с выраженной клеточной атипией с большей вероятностью прогрессируют и проникают в строму радужной оболочки. Эта публикация предлагает скорректировать номенклатуру с целью более точного определения этих диспластических меланоцитов. Это может быть полезно для разъяснения владельцам, особенно обеспокоенным при обнаружении высокой степени атипии, которая может с большей вероятностью перейти в ДМРК [9].

Rushton et al. (2017; 2019) выявили несколько изменений в экспрессии мРНК и белков генов при ДМРК, которые, как известно, играют ключевую роль в инициации и прогрессировании увеальной меланомы человека и собак [37; 38]. Однако генетические и транскриптомные данные по ДМРК скудны, и требуется дальнейшая работа для понимания генетических механизмов, ответственных за биологическое поведение ДМРК, участвующих в инициации, прогрессировании и метастазировании. Транскриптомные и генетические данные помогут прогнозировать эффективность новых методов терапии путём выявления молекулярных химиотерапевтических мишеней. Предоставленные данные смогут также улучшить диагностический результат хирургической биопсии ткани радужной оболочки, улучшая прогноз клинических исходов и потенциально предотвращая раннюю энуклеацию у кошек с ранней ДМРК или меланозом радужной оболочки.

Заключение

Кошки с гиперпигментированными поражениями радужной оболочки должны пройти полное общее и офтальмологическое обследование, включая гониоскопию. При медленно прогрессирующих поражениях или умеренных изменениях рекомендуются частые повторные осмотры и тщательная фотодокументация изменений. Биопсия радужной оболочки глаза должна быть предложена, чтобы помочь подтвердить диагноз ранней ДМРК, но должна интерпретироваться с осторожностью, если получен результат «меланоз радужной оболочки». Ультразвуковое исследование глаза и методы визуальной диагностики, такие как КТ или МРТ, должны рассматриваться в случаях ДМРК для оценки степени инвазии новообразования и выявления поражения периорбитальных костных структур, а также скрининга на наличие метастазов. Энуклеация в настоящее время является единственным рекомендуемым вариантом лечения случаев подтверждённой ДМРК. Трудности в прогнозировании прогрессирования заболевания и ограниченность данных, связанных с метастатическим потенциалом ДМРК, следует обсудить с владельцем пациента. Нет данных о влиянии адъювантной терапии, такой как вакцина против меланомы, на продолжительность жизни пациентов с подтверждёнными метастазами.

Уже предоставленные данные о метастатическом потенциале ДМРК должны быть проверены проспективными исследованиями, включающими данные последующего наблюдения, определение стадии метастазов и подтверждение на основе цитологии/гистопатологии метастатических поражений.

Понимание механизмов, ответственных за прогрессирование меланоза радужной оболочки до ДМРК и ранней ДМРК до прогрессирующего заболевания с высоким метастатическим потенциалом, бесценно для клиницистов для точного прогнозирования исходов и идентификации адъювантной химиотерапии. Генетический и транскриптомный ландшафт ДМРК представляет собой прекрасную возможность для будущих исследований в этой области.

---

Вклад авторов

Написание, подготовка оригинального проекта — Дэвид Кейс; написание, рецензирование и редактирование — Бенджамин Блэклок; надзор — Бенджамин Блэклок. Все авторы прочитали и согласились с опубликованной версией рукописи.

Финансирование

Это исследование не получило внешнего финансирования.

Благодарности

Благодарим Эмму Скаррелл (ветеринарная патология CytoPath), Линду Моррисон и Александру Малбон (отделение патологии Эдинбургского университета) за любезно предоставленные фотографии, использованные в статье.

Конфликт интересов

Авторы заявляют об отсутствии конфликта интересов.

---

Ключевые слова: кошки; увеальный; меланома; радужная оболочка; меланоз.

 

Литература

1. Dubielzig, R. R. World Small Animal Veterinary Association World Congress Proceedings. VIN.com. 2011. Available online: https://www.vin.com/apputil/content/defaultadv1.aspx?pId=11343&meta=VIN&catId=34577&id=5124351 (accessed on 29 May 2021).
2. Duncan, D.E.; Peiffer, R. L. Morphology and prognostic indicators of anterior uveal melanomas in cats. Prog. Vet. Comp. Ophthalmol. 1991, 1, 25–32.
3. Dubielzig, R.R.; Lindley, D. M. The relationship between pigmented spots on the feline iris and diffuse iris melanoma (abstract 96). Vet. Pathol. 1993, 30, 451.
4. Gelatt, K.N.; Gilger, B.C.; Kern, T. J. Veterinary Ophthalmology; Wiley-Blackwell: Hoboken, NJ, USA, 2021; Volume 28, p. 1715. [Google Scholar]
5. Kalishman, J.B.; Chappell, R.; Flood, L.A.; Dubielzig, R.R. A matched observational study of survival in cats with enucleation due to diffuse iris melanoma. Vet. Ophthalmol. 1998, 1, 25–29.
6. Patnaik, A.K.; Mooney, S. Feline Melanoma: A Comparative Study of Ocular, Oral, and Dermal Neoplasms. Vet. Pathol. 1988, 25, 105–112.
7. Wiggans, K.T.; Reilly, C.M.; Kass, P.H.; Maggs, D. J. Histologic and immunohistochemical predictors of clinical behavior for feline diffuse iris melanoma. Vet. Ophthalmol. 2016, 19, 44–55.
8. Dubielzig, R. R. Veterinary Ocular Pathology: A Comparative Review; Edinburgh; Saunders: New York, NY, USA, 2010.
9. Featherstone, H.J.; Scurrell, E.J.; Rhodes, M.; De Lacerda, R. P. Iris biopsy to investigate feline iris hyperpigmentation. Vet. Ophthalmol. 2019, 23, 269–276.
10. Jajou, S. Uveal Amelanotic Melanoma in a Ragdoll Cat. Can. Vet. J. 2020, 61, 645–647. Available online: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7238484/ (accessed on 27 November 2021).
11. Planellas, M.; Pastor, J.; Torres, M.D.; Pena, T.; Leiva, M. Unusual presentation of a metastatic uveal melanoma in a cat. Vet. Ophthalmol. 2010, 13, 391–394.
12. Grahn, B.H.; Peiffer, R.L.; Cullen, C.L.; Haines, D. M. Classification of feline intraocular neoplasms based on morphology, histochemical staining, and immunohistochemical labeling. Vet. Ophthalmol. 2006, 9, 395–403.
13. Wang, A.L.; Kern, T. Melanocytic Ophthalmic Neoplasms of the Domestic Veterinary Species: A Review. Top. Companion Anim. Med. 2015, 30, 148–157.
14. Albert, D.M.; Shadduck, J.A.; Craft, J.L.; Niederkorn, J. Y. Feline uveal melanoma model induced with feline sarcoma virus. Investig. Ophthalmol. Vis. Sci. 1981, 20, 606–624. Available online: https://iovs.arvojournals.org/article.aspx?articleid=2159067 (accessed on 29 November 2021).
15. Stiles, J.; Bienzle, D.; Render, J.; Buyukmihci, N.; Johnson, E. Use of nested polymerase chain reaction (PCR) for detection of retroviruses from formalin-fixed, paraffin-embedded uveal melanomas in cats. Vet. Ophthalmol. 1999, 2, 113–116. Available online: https://escholarship.org/uc/item/6zj8m893 (accessed on 29 November 2021).
16. Cullen, C.L.; Haines, D.M.; Jackson, M.L.; Grahn, B. H. Lack of Detection of Feline Leukemia and Feline Sarcoma Viruses in Diffuse Iris Melanomas of Cats by Immunohistochemistry and Polymerase Chain Reaction. J. Veter. Diagn. Investig. 2002, 14, 340–343.
17. Harris, B.P.; Dubielzig, R. R. Atypical primary ocular melanoma in cats. Vet. Ophthalmol. 1999, 2, 121–124.
18. Semin, M.O.; Serra, F.; Mahe, V.; Deviers, A.; Regnier, A.; Raymond-Letron, I. Choroidal melanocytoma in a cat. Vet. Ophthalmol. 2011, 14, 205–208.
19. Bourguet, A.; Piccicuto, V.; Donzel, E.; Carlus, M.; Chahory, S. A case of primary choroidal malignant melanoma in a cat. Vet. Ophthalmol. 2014, 18, 345–349.
20. Lamagna, B.; Uccello, V.; Prisco, F.; Russo, V.; Lamagna, F.; Navas, L.; Mennonna, G.; Murino, C.; Meomartino, L. Iris melanoma associated with unilateral phthisis bulbi in a 13-year-old domestic shorthair female cat. Vet. Q. 2019, 39, 131–135.
21. Fragola, J.A.; Dubielzig, R.R.; Bentley, E.; Teixeira, L.B.C. Iridociliary cysts masquerading as neoplasia in cats: A morphologic review of 14 cases. Vet. Ophthalmol. 2017, 21, 125–131.
22. Blacklock, B.T.; Grundon, R.A.; Meehan, M.; Pont, R.T.; Hartley, C. Uveal cysts in domestic cats: A retrospective evaluation of thirty-six cases. Vet. Ophthalmol. 2016, 19, 56–60.
23. Grahn, B.H.; Peiffer, R.L.; Wilcock, B. P. Histologic Basis of Ocular Disease in Animals; John Wiley & Sons: Hoboken, NJ, USA, 2019; pp. 409–422.
24. Ramos-Vara, J.A.; Miller, M. A. Immunohistochemical Identification of Canine Melanocytic Neoplasms with Antibodies to Melanocytic Antigen PNL2 and Tyrosinase. Vet. Ophthalmol. 2010, 48, 443–450.
25. Porcellato, I.; Silvestri, S.; Sforna, M.; Banelli, A.; Giudice, A.L.; Mechelli, L.; Brachelente, C. Tumor-infiltrating lymphocytes (TILs) in feline melanocytic tumors: A preliminary investigation. Vet. Immunol. Immunopathol. 2021, 242, 110337.
26. De Vries, T.J.; Trančikova, D.; Ruiter, D.J.; Van Muijen, G.N.P. High expression of immunotherapy candidate proteins gp100, MART-1, tyrosinase and TRP-1 in uveal melanoma. Br. J. Cancer 1998, 78, 1156–1161.
27. Kawakami, Y.; Eliyahu, S.; Delgado, C.H.; Robbins, P.F.; Rivoltini, L.; Topalian, S.L.; Rosenberg, S. A. Cloning of the gene coding for a shared human melanoma antigen recognized by autologous T cells infiltrating into tumor. Proc. Natl. Acad. Sci. USA 1994, 91, 3515–3519.
28. Smith, S.H.; Goldschmidt, M.; McManus, P.M. A Comparative Review of Melanocytic Neoplasms. Vet. Pathol. 2002, 39, 651–678.
29. McGary, E.C.; Lev, D.C.; Bar-Eli, M. Cellular adhesion pathways and metastatic potential of human melanoma. Cancer Biol. Ther. 2002, 1, 459–465.
30. Onken, M.D.; Ehlers, J.P.; Worley, L.A.; Makita, J.; Yokota, Y.; Harbour, J. W. Functional Gene Expression Analysis Uncovers Phenotypic Switch in Aggressive Uveal Melanoma. Cancer Res. 2006, 66, 4602–4609.
31. Malho, P.; Dunn, K.; Donaldson, D.; Dubielzig, R.R.; Birand, Z.; Starkey, M. Investigation of prognostic indicators for human uveal melanoma as biomarkers of canine uveal melanoma metastasis. J. Small Anim. Pr. 2013, 54, 584–593.
32. Schwarzenbach, H.; Hoon, D.S.B.; Pantel, K. Cell-free nucleic acids as biomarkers in cancer patients. Nat. Rev. Cancer 2011, 11, 426–437.
33. Rushton, J.G.; Ertl, R.; Klein, D.; Tichy, A.; Nell, B. Circulating cell-free DNA does not harbour a diagnostic benefit in cats with feline diffuse iris melanomas. J. Feline Med. Surg. 2018, 21, 124–132.
34. Berry, J.L.; Xu, L.; Polski, A.; Jubran, R.; Kuhn, P.; Kim, J.W.; Hicks, J. Aqueous Humor Is Superior to Blood as a Liquid Biopsy for Retinoblastoma. Ophthalmology 2020, 127, 552–554. Available online: https://reader.elsevier.com/reader/sd/pii/S0161642019321840?tken=1EEAC7A973630FA81DCB95A68DA748EBEA0A76658EB38FDC5E126E5319A1F1F3385BA8DD8A4AC1E3BCF170DC34AF6BA6&originRegion=eu-west-1&originCreation=20211230192031 (accessed on 30 December 2021).
35. Polski, A.; Xu, L.; Prabakar, R.K.; Kim, J.W.; Shah, R.; Jubran, R.; Kuhn, P.; Cobrinik, D.; Hicks, J.; Berry, J. L. Cell-Free DNA Tumor Fraction in the Aqueous Humor Is Associated with Therapeutic Response in Retinoblastoma Patients. Transl. Vis. Sci. Technol. 2020, 9, 30. Available online: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC7533735/ (accessed on 30 December 2021).
36. Lee, N.; Zakka, L.R.; Mihm, M.C., Jr.; Schatton, T. Tumour-infiltrating lymphocytes in melanoma prognosis and cancer immunotherapy. Pathology 2016, 48, 177–187.
37. Rushton, J.G.; Ertl, R.; Klein, D.; Nell, B. Mutation analysis and gene expression profiling of ocular melanomas in cats. Vet. Comp. Oncol. 2017, 15, 1403–1416.
38. Rushton, J.G.; Korb, M.; Kummer, S.; Reichart, U.; Fuchs Baumgartinger, A.; Tichy, A.; Nell, B. Protein expression of KIT, BRAF, GNA11, GNAQ and RASSF1 in feline diffuse iris melanomas. Vet. J. 2019, 249, 33–40. Available online: https://www.sciencedirect.com/science/article/pii/S1090023319300504?via%3Dihub (accessed on 29 May 2021).
39. Dhomen, N.; Marais, R. New insight into BRAF mutations in cancer. Curr. Opin. Genet. Dev. 2007, 17, 31–39.
40. Davies, H.; Bignell, G.R.; Cox, C.; Stephens, P.; Edkins, S.; Clegg, S.; Teague, J.; Woffendin, H.; Garnett, M.J.; Bottomley, W.; et al. Mutations of the BRAF gene in human cancer. Nature 2002, 417, 949–954. Available online: https://www.nature.com/nature/journal/v417/n6892/full/nature00766.html (accessed on 22 January 2022).
41. Van Raamsdonk, C.D.; Bezrookove, V.; Green, G.; Bauer, J.; Gaugler, L.; O’Brien, J.M.; Simpson, E.M.; Barsh, G.S.; Bastian, B. C. Frequent somatic mutations of GNAQ in uveal melanoma and blue naevi. Nature 2009, 457, 599–602.
42. Yu, F.-X.; Luo, J.; Mo, J.-S.; Liu, G.; Kim, Y.; Meng, Z.; Zhao, L.; Peyman, G.; Ouyang, H.; Jiang, W.; et al. Mutant Gq/11 Promote Uveal Melanoma Tumorigenesis by Activating YAP. Cancer Cell 2014, 25, 822–830.
43. Wettschureck, N.; Offermanns, S. Mammalian G Proteins and Their Cell Type Specific Functions. Physiol. Rev. 2005, 85, 1159–1204.
44. Pereira, P.R.; Odashiro, A.N.; Marshall, J.C.; Correa, Z.M.; Belfort, R.; Burnier, M. N. The role of c-kit and imatinib mesylate in uveal melanoma. J. Carcinog. 2005, 4, 19. Available online: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1282581/ (accessed on 27 November 2021).
45. Babaei, M.A.; Kamalidehghan, B.; Saleem, M.; Huri, H.Z.; Ahmadipour, F. Receptor tyrosine kinase (c-Kit) inhibitors: A potential therapeutic target in cancer cells. Drug Des. Dev. Ther. 2016, 10, 2443–2459.
46. Bergman, P.; Camps-Palau, M.; McKnight, J.; Leibman, N.; Craft, D.; Leung, C.; Liao, J.; Riviere, I.; Sadelain, M.; Hohenhaus, A.; et al. Development of a xenogeneic DNA vaccine program for canine malignant melanoma at the Animal Medical Center. Vaccine 2006, 24, 4582–4585.]
47. Liao, J.C.F.; Gregor, P.; Wolchok, J.D.; Orlandi, F.; Craft, D.; Leung, C.; Houghton, A.N.; Bergman, P. J. Vaccination with human tyrosinase DNA induces antibody responses in dogs with advanced melanoma. Cancer Immun. 2006, 6, 8. Available online: https://www.ncbi.nlm.nih.gov/pmc/articles/PMC1976276/ (accessed on 29 November 2021).
48. Grosenbaugh, D.A.; Leard, A.T.; Bergman, P.J.; Klein, M.K.; Meleo, K.; Susaneck, S.; Hess, P.R.; Jankowski, M.K.; Jones, P.D.; Leibman, N.F.; et al. Safety and efficacy of a xenogeneic DNA vaccine encoding for human tyrosinase as adjunctive treatment for oral malignant melanoma in dogs following surgical excision of the primary tumor. Am. J. Veter. Res. 2011, 72, 1631–1638.
49. Sarbu, L.; Kitchell, B.E.; Bergman, P. J. Safety of administering the canine melanoma DNA vaccine (Oncept) to cats with malignant melanoma — A retrospective study. J. Feline Med. Surg. 2016, 19, 224–230.

Источник: Vet. Sci. 2022, 9(2), 46. © 2022 by the authors. Licensee MDPI, Basel, Switzerland. This article is an open access article distributed under the terms and conditions of the Creative Commons Attribution (CC BY) license (https://creativecommons.org/licenses/by/4.0/).

 

СВМ № 5/2023

---

Вам также могут быть интересны статьи:

Меланоз роговицы у собак

Разные типы опухолей полости рта

Витилиго, ассоциирующееся со злокачественной меланомой у собаки