Ж.-П. Буфис
Постановка диагноза на гемобартонеллез у кошки не представляет трудностей, если все эритроциты несут на себе один или несколько микроорганизмов.
Гемобартонелла кошек – это риккетсия, которая локализуется на поверхности эритроцитов и имеет форму небольших кокков (0,3-0,5 мкм в диаметре), бацилл (от 0,2–0,5 до 0,9–1,5 мкм), или колец (1 мкм в диаметре) (J.L. Vanstenhouse et coll., 1993; M.T. Butt, 1990). Кокки и бациллы в основном визуализируются на периферийной части эритроцитов, в то время как кольца – на их поверхности или внутри. Эти микроорганизмы могут быть изолированными, организовываться в цепочки или скопления (M.T. Butt, 1990). Адгезируясь на мембране эритроцитов, гемобартонелла кошек (H. felis) провоцирует их повреждение с последующим формированием антигенов на мембране, что и является причиной развития гемолитической анемии. В мазках крови при этом часто отмечают картину регенерации с проявлением полихроматофилии и анизоцитоза эритроцитов. Ввиду малого размера инфекционного агента, который иногда с большим трудом поддается визуализации, на мазок рекомендуется наносить свежую каплю крови, или кровь вместе с антикоагулянтом, но через относительно небольшой промежуток времени с момента ее взятия и без предварительного резкого встряхивания, что позволяет избежать возможность отделения гемабортонелл от эритроцитов (J.L. Vanstenhouse et coll., 1993).
Применение обычного и быстрого метода окраски исследуемого материала в изготовленном мазке позволяет поставить окончательный диагноз. Не следует вести поиск гемобартонелл в мазке, окрашенного витальным красителем (новый голубой метиленовый, голубой бриллиантовый кризил и т.д.), который предназначен для обнаружения ретикулоцитов. Это объясняется тем, что при таком способе окраски невозможно отличить микроорганизмы от визуализируемых гранул этих клеток или телец Гейнза. И, наконец, мазки следует очень хорошо отмыть, что позволяет избежать артефакта (присутствия кускочков краски, которые также мешают в постановке диагноза).
Постановка диагноза на гемобартонеллез у кошки не представляет трудностей, если все эритроциты несут на себе один или несколько микроорганизмов (фото 2). Однако количество гемобартонелл в исследуемом мазке крови может быть незначительным, что вызывает относительную сложность в их обнаружении (фото 3), или они могут и вовсе отсутствовать, даже несмотря на острое течение заболевания, при котором инфекционный агент, казалось бы, выявить намного проще, и он может визуализироваться в 50% случаев. В связи с этим, некоторые авторы рекомендуют повторять мазки регулярно в течение трех, четырех и даже семи дней (M.T. Butt, 1990; N.C. Jain, 1986). С другой стороны, при остром течении заболевания или после проведения курса лечения гемобартонелл, как правило, уже не обнаруживают в мазках крови (фото 5), несмотря даже на то, что кошка обычно остается хроническим носителем возбудителя инфекции (M.T. Butt, 1990).
 |
 |
 |
| Фото 1. Картина, характерная для гемобартонеллеза кошек, изолированных, в форме скоплений и цепочек, визуализируемых на эритроцитах кошки. В данном случае имеет место полихроматофилия и анизоцитоз эритроцитов (кровь, Diff Quick, ×1000). | Фото 2. Очень большое количество возбудителей гемобартонеллеза, потому что все эритроциты являются носителями микроорганизма. Следует отметить отсутствие регенеративного процесса (кровь, Diff Quick, ×1000). | Фото 3. Гемобартонелла визуализируется хуже, чем на предшествующей фотографии. Но при этом мы выявляем выраженную полихроматофилию эритроцитов (кровь, Diff Quick, ×1000). |
Когда не удается выявить наличие возбудителя, то несмотря ни на что предположительный диагноз на данное заболевание ставят при обнаружении регенеративной анемии, при этом также отмечают полихроматофилию и анизоцитоз эритроцитов (фото 1, 3, 4 и 5), а также большое количество эритробластов, и эритроцитов, содержащих тельца Говелла-Жолли (Howell-Jolly2, фото 4, 5). Кроме того, предположительный диагноз на данное заболевание ставят на основании выявления регенеративной анемии в ассоциации с развитием эритрофагоцитоза (фото 4) или позитивного прямого теста Кумбса. Такая картина требует проведения длительного поиска на обнаружение гемобартонелл, а также рекомендуется назначение доксициклина, несмотря на отрицательные результаты.
 |
 |
| Фото 4. Возбудитель H. felis относительно редко встречается в данном мазке крови, но мы видим эритроцит, подверженный фагоцитозу, который содержит в себе гемобартонеллы (в центре фотографии), а также выраженную регенерацию крови с присутствием двух эритробластов и пойкилоцитов (стрелка) (кровь, Diff Quick, ×1000). | Фото 5. Мазок крови, выполненный через 48 часов с момента завершения курса лечения гемобартонеллеза у кошки: отмечается картина регенерации, наличие одного эритробласта и двух телец Howell-Jolly в эритроцитах (стрелки); но при этом H. felis отсутствует в мазке крови (кровь, Diff Quick, ×1000). |
Мазок крови не всегда имеет картину регенерации (фото 2): когда мы выявляем персистенцию гемобартонелл без проявления регенеративных процессов крови, то это позволяет нам сказать, что:
- пациент пребывает в начале острого течения инфекционного заболевания;
- регенерация еще не началась и гемобартонеллы при этом могли быть случайно обнаружены в мазке, и они не являются причиной данного заболевания;
- следует иметь в виду возможность наличия сопутствующего заболевания (инфицирование FeLV, повреждение костного мозга), которое исключает процесс регенерации: если поиск инфекций на FeLV и FIV всегда рекомендуют проводить в случае выявления гемобартонеллеза, то это показание также оправдано при обнаружении гемобартонелл в мазках крови с отсутствием признаков регенерации (M.T. Butt, 1990; M. Eibert, D.C. Lewis, 1997).
Малый размер гемобартонелл вызывает сложности в дифференциации их от артефактов, в основном – очень мелких частиц или скоплений красителя, остающегося в случае плохой промывки предметного стекла. С другой стороны, эти артефакты в случае приготовления мазка, а также разные грануляции или включения в эритроцитах кошки необходимо уметь дифференцировать от персистенции H. Felis:
- тельца Howell-Jolly отличаются сетчатым ядром, и их присутствие в норме составляет менее 0,5% от всех эритроцитов у кошки (J.F. Guelfi, 1995). Кроме того, как сообщают M.T. Butt (1990), J.F. Guelfi (1995) и N.C. Jain (1986), эти тельца значительно крупнее, с более выраженной базофилией в отличие от гемобартонелл и, как правило, локализуются в центральной части эритроцита, а не на его периферии (фото 5);
- тельца Гейнза — это элементы, состоящие из денатурированного гемоглобина, размер которых обычно колеблется в пределах 0,5–1 мкм в диаметре, но иногда способных достигать 3 мкм. Они, как и тельца Howell-Jolly, фиксируются на периферийной части эритроцитов, а именно на их деформированной мембране или являются изолированными (вне эритроцитов) в мазке крови. Присутствие нескольких телец Гейнза у кошки соответствует норме, но их число в основном возрастает в случае отравления веществом, вызывающим метгемоглобинизацию (M. Eibert, D.C. Lewis, 1997; M.T. Butt, 1990; J.F. Guelfi, 1995; N.C. Jain, 1986). Тельца Гейнза не окрашиваются обычным методом и значительно превышают по своим размерам гемобартонелл (фото 6). Следовательно, сложности в дифференциации нет, за исключением применения витального красителя (см. комментарии на фото 1);
- грануляции дизэритропоэза: речь в данном случае идет об очень мелких частичках нуклеарного аппарата, которые обычно наблюдают при инфицировании FeLV, и крайне редко встречающемся отравлении у кошек свинцом (J.F. Guelfi, 1995).
 |
 |
| Фото 6. Большое количество телец Гейнза, локализующихся на периферийной части эритроцитов кошки, при этом некоторые из них изолированные и локализуются между эритроцитами (стрелка) (кровь, Diff Quick, ×1000). | Фото 7. Дизэритропоэз: мы отмечаем большое количество гранул варьирующегося размера (большие гранулы или маленькие глыбы) в эритроцитах кошки, инфицированной FeLV (Diff Quick, ×1000). |
Дифференциальную диагностику, вероятно, будет трудно провести, особенно при регенеративной анемии, которую также отмечают при гемобартонеллезе и инфицировании FeLV. Несмотря на то, что размеры визуализируемых форм окраски сходные, тем не менее, наблюдаемые признаки у гемобартонелл относительно стабильные (фото 1–3) с присутсвием нескольких свойственных им элементов: форма кольца и изменение положения в цепочке (фото 1, 2). Что касается деформированного хроматина, который мы можем наблюдать при инфицировании FeLV, то его размер и форма сильно варьируются, и в одном эритроците мы можем наблюдать достаточно крупные гранулы и очень мелкие частицы нуклеарного аппарата (фото 7). С другой стороны, при дизэритропоэзе, отмечаются и другие аномалии эритроидного или лейкоцитарного ряда.
СВМ 1/2006