Клинический случай
E. LEE1‘2, A. KIM12, E. LEE1‘2, S. PARK1, K. JEONG1‘2
1College of Veterinary Medicine, Kyungpook National University, Daegu City, Republic of Korea
2Stem Cell Therapeutic Research Institute, Kyungpook National University, Daegu City, Republic of Korea
Список сокращений
СИТЕС — Конвенция о международной торговле видами дикой фауны и флоры, находящимися под угрозой исчезновения (Convention on International Trade in Endangered Species of Wild Fauna and Flora, CITES), E. coli — Escherichia coli, GMSN — Gomori’s methenamine silver nitrate, ГЭ — гематоксилин-эозин, ШИК — шифф-йодная кислота
Инфекционные заболевания, включая те, которые вызываются бактериями, грибами и вирусами, являются причиной значительных экономических потерь в отношении различных видов птиц. Клинически важные бактериальные патогены включают виды Alcaligenes/Bordetella, Campylobacter, Clostridium, Erysipelothrix, Escherichia coli (E. coli), Haemophilus, Listeria, Mycobacterium, Pasteurella, Pseudomonas, Aeromonas, Salmonella, Staphylococcus, Streptococcus, Enterococcus, и Yersinia [Gerlach 1994]. Распространённые грибковые заболевания включают кандидоз, аспергиллёз и криптококкоз [Gerlach 1994]. Для контроля этих инфекционных заболеваний птиц важно профилактировать и лечить не только первичную инфекцию, но и возможную передачу другим животным, а также рецидивы, устанавливая точные диагнозы, особенно для птиц, находящихся под угрозой исчезновения, таких, как виды, упомянутые в Конвенции о международной торговле видами дикой фауны и флоры, находящимися под угрозой исчезновения (СИТЕС).
Синелобый амазон (Amazona aestiva) занесён в Приложение II СИТЕС согласно корейскому законодательству, но не включён в СИТЕС по европейскому закону (Постановление комиссии ЕС). СИТЕС является международным соглашением, цель которого – быть уверенными в том, что международная торговля дикими животными и растениями не угрожает сохранению видов. Приложение I включает виды, находящиеся на грани исчезновения. Торговля образцами этих видов разрешается только в исключительных обстоятельствах. Приложение II содержит виды, не обязательно находящиеся под угрозой исчезновения, но для которых торговля должна находиться под контролем, чтобы предотвратить использование, несовместимое с их сохранением.
В настоящей работе мы описываем два случая заболевания синелобых амазонов, которые погибли в результате сепсиса, возникшего вследствие сочетанной инфекции, вызванной грибами (Candida) и бактериями (грам-отрицательными палочками).
Разбор клинического случая
Два синелобых амазона (Amazona aestiva) были ввезены в Корею, через несколько дней после смены корма у них началась сильная потеря веса (с 350 до 220 г), изнурение, слабость и диарея. Радиография выявила расширение зоба и кишечника и системное нарушение кровообращения. Многочисленные дрожжи (Candida spp.) были обнаружены при цитологическом исследовании слизистой оболочки зоба. Один попугай погиб спустя несколько часов, другой – несколько дней после медицинского обследования, посмертная диагностика для определения причины смерти каждого животного была проведена в Департаменте ветеринарной патологии Национального университета Кёнгбук.
Было проведено патологоанатомическое вскрытие, паренхиматозные органы собраны и зафиксированы 10% нейтральным буферным раствором формалина (DC Chemical Co., Корея) для гистопатологического исследования. Образцы тканей были приготовлены с использованием стандартных методов, заполнены парафином, после чего были сделаны срезы толщиной 4 µм. Препараты были депарафинизированы толуолом (Duksan Pure Chemical, Корея) и обезвожены серией ступенчатого спиртования. Было проведено окрашивание гематоксилин-эозином (ГЭ), шифф-йодной кислотой (ШИК), метенамин-серебряным нитратом по Гомори (ГМСН) и по Граму.
У первого попугая макроскопическое исследование выявило тяжёлую кахексию и истончение кожи. Следы диареи наблюдались вокруг клоаки (изображение 1А), в пищеводе присутствовали рвотные массы. В целомической полости содержалось в заметном количестве жёлтое фибринозное вещество. Зоб содержал творожистые поражения в виде белого слоя, выстилающего слизистую оболочку (изображение 1B).
На печени и селезёнке наблюдались патологические очаги белого цвета (изображение 1C, D). Почки были дряблыми и имели выраженную зелёную окраску. При микроскопическом исследовании выявлены изъязвления слизистой оболочки зоба, содержащие гифы и споры грибов (Candida spp.), а также колонии бактерий в изъязвлённых участках. Тяжёлая грибковая инфекция была подтверждена с помощью методов окрашивания ШИК и ГМНС, при окрашивании по Граму были выявлены грам-отрицательные палочки (рис. 2). Палочкообразные грам-отрицательные бактерии также наблюдались в фибринозном содержимом, в значительном количестве присутствовавшем в камерах сердца (изображение 3A-C). Наблюдалось отторжение эпителия трахеи от базальной мембраны, эпителиальные клетки, в основном, отсутствовали. Хрящевые кольца трахеи были минерализированы. Паренхима лёгких содержала значительное количество узелковых утолщений, состоящих из воспалительных клеток и бактерий. В интерстициальной ткани лёгких присутствовали скопления макрофагов, поглотивших грам-отрицательные палочки (изображение 3D, E). Альвеолярные капилляры были наполнены, присутствовали лёгочные геморрагии. Как и в лёгких, маленькие узелковые утолщения из макрофагов и бактерий присутствовали в паренхиме печени (изображение 3F, G). Палочкообразные бактерии также наблюдались внутри печёночных вен. Гепатоциты были некротизированы и лизированы (изображение 4A–C). В селезёнке выявлены апоптоз, проявившийся в виде картины «звёздного неба», и некроз. Клетки трубчатого эпителия почек были лизированы, присутствовали пенистые макрофаги (изображение 4F, G). Кератиновый слой мускульного желудка в некоторых участках отсутствовал. В слизистом желудке и тонком кишечнике значительная часть железистых эпителиальных клеток была лизирована.
У второго попугая при вскрытии обнаружены следы рвоты вокруг рта и следы диареи вокруг клоаки. Зоб содержал редкие творожистые поражения, геморрагические поражения наблюдались на протяжении всего пищеварительного тракта (зоб, железистый и мускульный желудки, кишечник). В частности, в тонком отделе кишечника были отмечены сильные петехиальные геморрагии и истончение. Селезёнка была дряблая и бледная, на мезентериальных лимфатических узлах видны геморрагии. Гистопатологически выявлены дегенеративные изменения эпителия зоба и обнаружены гифы и споры грибов (Candida spp.), а также колонии бактерий. Грибковая инфекция подтверждена ШИК-окрашиванием (изображение 5A–C). Слизистая оболочка пищеварительного тракта, включая слизистую железистого и мускульного желудков, тонкого и толстого кишечника, была в значительной степени отслоившаяся и лизированная (изображение 5D–G). В кишечнике отмечены дилятация кровеносных сосудов и средней степени кровоизлияния. Инфильтрация плазменными клетками и лимфоцитами наблюдались в собственной пластинке слизистой оболочки кишечника. Паренхиматозные органы, включая печень, селезёнку и почки, содержали некротические и / или апоптотические поражения (изображение 6A–F). Паренхима лёгких была набухшая, альвеолярные капилляры значительно наполнены (изображение 6G, H). Трахеальные хрящи были минерализированы, дегенерированы и содержали геморрагии.
| Изображение 1. Изменения, обнаруженные при макроскопическом посмертном исследовании синелобого амазона (Amazona aestiva). У первого попугая наблюдаются (A) следы диареи вокруг ануса, творожистые повреждения (B), в виде белого слоя, выстилающего слизистую оболочку зоба, и патологические очаги белого цвета (C, D) в толще печени и селезёнки (стрелки) |
 |
| Изображение 2. Микроскопическая картина зоба первого попугая. На слизистой зоба наблюдаются (A) изъязвления слизистого слоя. Гифы Candida, споры и колонии бактерий обнаружены в участках этих изъязвлений. Наблюдается (B–D) тяжёлая грибковая инфекция. Грам-отрицательные палочки (E) видны при окрашивании по Граму |
 |
Изображение 3. Микроскопическая картина сердца и лёгких первого попугая. Палочкообразные бактерии (A, B) и значительные фибринозные отложения обнаружены в желудочках сердца. Палочкообразные грам-отрицательные бактерии (C) также выявлены при окрашивании по Граму. Макрофаги, фагоцитировавшие бактерии (D, E), сформировали узелковые утолщения внутри легочной интерстициальной ткани. Узелки, содержащие воспалительные клетки (F, G) и палочкообразные грам-отрицательные бактерии наблюдаются в паренхиме лёгких, альвеолярные капилляры наполнены.
Изображение 4. Микроскопическая картина печени, селезёнки и почек первого попугая. Маленькие узелковые утолщения, содержащие макрофаги (A–C), найдены в паренхиме печени. Бактерии присутствуют в крови печёночных сосудов и паренхиме. Апоптоз, проявившийся в виде картины «звёздного неба» (D, E), и некроз отмечены в селезёнке. Лизированые клетки трубчатого эпителия почек (F, G) и пенистые макрофаги обнаружены в почках.
Изображение 5. Микроскопическая картина пищеварительного тракта второго попугая. Эпителий зоба в состоянии дегенерации (A–C), гифы и споры грибов (Candida spp.) и колонии палочкообразных бактерий присутствуют в этих повреждениях. Слизистый эпителий пищеварительного тракта (D–G), включая железистый и мышечный желудки, тонкий и толстый кишечник, в значительной степени слущен и лизирован.
 |
| Изображение 6. Микроскопическая картина паренхиматозных органов второго попугая. Паренхиматозные органы, включая печень, селезёнку и почки имеют некротические и / или апоптические повреждения. Паренхима лёгких набухшая, альвеолярные капилляры наполнены |
 |
Обсуждение и выводы
Грибковые инфекции довольно распространены у птиц, к ним относятся аспергилёз, кандидоз, дактилариоз, криптококкоз, парша, родоторулёз, торулёз, мукормикоз и гистоплазмоз. Среди этих болезней самой значимой для птиц является кандидоз [Hubalek 1978; Dhama et al. 2013].
Кандидоз вызывается грибами рода Candida, который включает приблизительно 200 видов. Среди них наиболее часто встречающимся и клинически значимым является C. albicans [Odd 1994; Dhama et al. 2013]. Хотя виды рода Candida являются нормальной составляющей флоры желудочно-кишечного тракта, чрезмерный рост грибов и заболевание могут возникать у пациентов при наличии различных факторов риска, которые подавляют иммунную систему макроорганизма, включая недостаточное питание, дефицит витамина D, плохую гигиену, длительное применение антибиотиков, которые подавляют нормальную бактериальную флору, и стресс. В описываемом случае попугаи были импортированы из-за границы, их питание поменялось за несколько дней до смерти. Мы полагаем, что длительное путешествие и внезапная смена корма стали стресс-факторами, которые ослабили иммунную систему и вызвали чрезмерный рост Candida.
У инфицированных птиц наблюдаются плохой рост, депрессия, анорексия, диарея и дегидратация, у птиц, поражённых в значительной степени, это может приводить к смертельному исходу [O’Meara and Witter 1971; Bauck 1994; Chute 1997; Oglesby 1997; Velasko 2000; Dhama et al. 2013]. Обычно повреждения отмечаются в ограниченных участках верхнего отдела пищеварительного тракта. Происходит пролиферация грибов, они формируют гифы или псевдогифы на поверхности верхних отделов ЖКТ и захватывают эпителиальные слои. Это приводит к гиперплазии и образованию псевдомембран, что макроскопически проявляется в виде творожистых образований, обычно локализующихся в зобе [Mayeda 1961; Velasko 2000; Dhama et al. 2013]. Обычно наблюдаются образование псевдомембран на протяжении верхнего отдела пищеварительного тракта и эрозии слизистой оболочки в железистом и мышечном желудках наряду с воспалением кишечника [O’Meara and Witter 1971; Chute 1997; Bethea et al. 2010; Dhama et al. 2013]. У попугаев в двух рассматриваемых случаях выявлены кандидоз зоба и изъязвление с отслоением слизистого эпителия органов пищеварения. Бактериальная пролиферация присутствовала также в поражённом зобе. У одного из попугаев бактерии были обнаружены и в других органах, включая сердце, лёгкие и печень. Рост бактерий в зобе и последующая системная диссеминация, объясняют другие системные поражения, включая некроз, геморрагии и гиперемию паренхиматозных органов. Мы предполагаем, что чрезмерный рост и размножение Candida разрушили связи слизистого слоя и изменили микрофлору зоба, что позволило бактериям пролиферировать и распространиться в другие системные органы.
Грам-отрицательные палочки были обнаружены в обоих описываемых случаях. Среди известных патогенов птиц к грам-отрицательным палочкообразным бактериям относятся E. coli, Salmonella, Klebsiella, Yersinia, Pseudomonas, Aeromonas, Campylobacter, Vibrio, Pasteurella, Haemophilus, и Acinetobacter spp. Среди них пищеварительный тракт птиц поражают E. coli, Salmonella, Pseudomonas, Aeromonas, и Pasteurella; E. coli вызывает колисептицемию, которая проявляется острой апатичностью, анорексией, взъерошенным оперением, диареей, полиурией и потерей веса. Катаральный энтерит является частым, но неспецифичным поражением. E. coli может вызывать фиброзный полисерозит (преимущественно с образованием жёлтого фибрина) и появление серых очагов (гранулём) разного размера на печени, под серозной оболочкой кишечника, на селезёнке или почках, что обычно обнаруживается при вскрытии. Инфекция, вызванная E. coli, может также приводить к септицемии и смерти [Bauck 1994]. Хотя для специфической диагностики требуется выращивание и идентификация микроорганизмов из поражённых тканей, полисерозит и образование гранулём (серых очагов) в органах обычно говорят о наличии поражения E. coli.
У животных, погибших от септического шока, обычно наблюдаются признаки полостной болезни лёгких, пульмонарные отёки, петехиальные геморрагии, гиперемия печени и кишечника и дегидратация. Типичная микроскопическая картина поражений включает острый некроз почечных канальцев, центролобулярных гепатоцитов, сердечных миоцитов, адреналовых клеток и верхушек кишечных ворсинок [Ackermann 2006].
Основываясь на гистопатологической картине и клинических проявлениях болезни, мы предположили, что попугаи в описанных случаях погибли в результате сепсиса, возникшего вследствие сочетанной инфекции зоба, возбудителями которой стали Candida spp. и грам-отрицательные палочкообразные бактерии. Безусловно, профилактика лучше лечения, и эффективная профилактика и контроль являются лучшей стратегией почти для всех заболеваний. В разведении птиц профилактика необходима для исключения каких-либо факторов риска, таких как стресс, недостаточные питание и уход или иные заболевания.
Работа выполнена при поддержке Программы развития сельскохозяйственной биотехнологии Министерства продовольствия, сельского, лесного и рыбного хозяйства Республики Корея (грант № 312062-5).
Литература
Ackermann MR (2006): Acute inflammation, 138–140. In: McGavin MD, Zachary JF. (eds.): Pathologic Basis of Veterinary Disease. 4th ed. Elsevier Health Sciences, Philadelphia. 1476 pp.
Bauck LB (1994): Mycoses, 998–1006. In: Ritchie BW, Harrison GJ, Harrison LR. (eds.): Avian Medicine: Principles and Application. Wingers Publishing, Lake Worth. 1384 pp.
Bethea EK, Carver BJ, Montedonico AE, Reynolds TB (2010): The inositol regulon controls viability in Candida glabrata. Microbiology 156, 452–462.
Chute HL (1997): Mycosis of the digestive tract, 361–365. In: Calnek BW (ed.): Diseases of Poultry. 10th ed. Iowa State University, Ames. 1080 pp.
Dhama K, Chakraborty S, Vrma AK, Tiwari R, Barathidasan R, Kumar A, Singh SD (2013): Fungal/mycotic diseases of poultry-diagnosis, treatment and control: A Review. Pakistan Journal of Biological Sciences 16, 1626–1640.
Gerlach H (1994): Bacteria, 950–964. In: Ritchie BW, Harrison GJ, Harrison LR (eds.): Avian Medicine: Principles and Application. Wingers Publishing, Lake Worth. 1384 pp.
Hubalek Z (1978): Coincidence of fungal species associated with birds. Ecology 59, 438–442.
Mayeda B (1961): Candidiasis in turkeys and chickens in the Sacramento Valley of California. Avian Diseases 54, 232–243.
O’Meara DC, Witter JF (1971): Candidiasis, 163–169. In: Davis JW, Anderson RC, Karstad L, Trainer DO (eds.): Infectious and Parasitic Diseases of Wild Birds. Iowa State University Press, Ames, 344 pp.
Odd FC (1994): Candida species and virulence. ASM News 60, 313–361.
Oglesby BL (1997): Mycotic diseases, 327. In: Altman RB (ed.): Avian Medicine and Surgery. 1st ed. W.B. Saunders Company, Philadelphia. 1070 pp.
Velasko MC (2000): Candidiasis and Cryptococcosis in birds. Seminar in Avian and Exotic Pet Medicine 9, 75–81.
Источник: Veterinarni Medicina, 61, 2016 (5): 288–294. Open Access Policy: this journal provides immediate open access to its content on the principle that making research freely available to the public supports a greater global exchange of knowledge.
СВМ № 6/2016