Аннотация
Вирусная лейкемия кошек – практическая значимость. Вирус лейкемии кошек (ВЛК, FeLV) является ретровирусом, поражающим домашних кошек и распространённым во всём мире. У кошек, не имеющих сильного специфического иммунитета к ВЛК и подвергающихся прогрессирующей инфекции, заболевание приводит к смертельному исходу. Многие аспекты патогенеза инфекции ВЛК уже выяснены, некоторые — с использованием молекулярных методов. Рекомендуется определять ВЛК-статус каждой кошки, так как ВЛК-инфекция может влиять на прогноз и клиническое ведение любой больной кошки. Знание ВЛК-статуса кошки также имеет значение для предотвращения дальнейшего распространения инфекции.
Клинические задачи. Диагностика ВЛК остаётся сложной задачей из-за многообразия исходов инфекции, которые могут с течением времени варьировать в зависимости от баланса между вирусом и иммунной системой кошки. К тому же, тестирование на ВЛК стало более совершенным и на настоящий день включает анализы на различные вирусные и иммунологические параметры. Знание патогенеза инфекции, а также особенностей методов выявления ВЛК является важной предпосылкой для правильной интерпретации результатов любых тестов и точного определения ВЛК-статуса кошки.
Цели. В этом обзоре представлены последние знания о патогенезе ВЛК, ключевых признаках, которые необходимо выявить, и часто используемых методах обнаружения ВЛК, а также их характеристиках и интерпретации результатов. В статью включён алгоритм диагностики ВЛК у отдельно взятой кошки, разработанный Европейским консультативным советом по болезням кошек (European Advisory Board on Cat Diseases), и рассматривается тестирование на ВЛК в различных ситуациях. Главная цель — внести вклад в диагностическую экспертизу, чтобы практикующие ветеринарные врачи улучшили диагностику ВЛК и могли ещё больше снизить его распространённость.
 |
|
Regina Hofmann-Lehmann, |
Katrin Hartmann, |
Ключевые слова: ВЛК, FeLV, ретровирус, диагностические тесты, патогенез, исход инфекции, антиген, антитело, ИФА, ПЦР, ОТ-ПЦР, выделение вируса, серология.
Вирус лейкемии кошек: разгадываем ребус
Вирус кошачьей лейкемии (ВЛК) — хорошо известный патоген, встречающийся во всём мире у домашних и мелких диких кошек [1; 2]. Это гаммаретровирус, который более 50 лет назад был впервые описан как «вирусоподобная частица, связанная с лейкемией (лимфосаркомой)» Джарреттом и соавторами [3]. У кошек с прогрессирующей формой заболевания инфекция ВЛК может вызывать иммунодефицит, цитопении и неоплазию [4–10]. Использование всё более надёжных и точных анализов для выявления кошек, инфицированных ВЛК, и разработка эффективных вакцин против него привели к снижению распространённости этой инфекции у домашних кошек во многих географических районах [7; 11–13], хотя в последнее время сообщалось о стагнации в снижении распространённости ВЛК [14–16]. Если ВЛК своевременно не распознать, существует риск быстрого распространения болезни, особенно среди групп невакцинированных кошек. В этом обзоре обобщены последние разработки, имеющие клиническое значение, особенно для диагностики, а также для понимания патогенеза инфекции.
 |
| Илл. 1. Схематическая диаграмма, показывающая течение инфекционного процесса во времени после заражения кошки вирусом кошачьей лейкемии (ВЛК) и четыре потенциальных исхода (прогрессирующая, регрессирующая, очаговая [редкая] и абортивная инфекция). Кошки изображены в соответствии с их статусом по антигену ВЛК p27 (красный), ДНК провируса ВЛК (фиолетовый) и нейтрализующими антителами (nAb; зелёный). При регрессивной инфекции вероятность реактивации (рецидива виремии и выделения вируса у ранее ВЛК p27 антиген-негативных, авиремических кошек) со временем уменьшается. †= летальный исход |
Воздействие ВЛК на организм и исходы инфекции
ВЛК представляет собой оболочечный РНК-вирус. Он несёт фермент (обратную транскриптазу), с помощью которого геном вирусной РНК преобразуется в ДНК, которая затем с помощью другого фермента, интегразы, интегрируется в геном клетки хозяина как провирус [1; 2; 17]. Кроме экзогенного ВЛК у домашних кошек было выявлено несколько эндогенных ретровирусов [1; 18; 19]. Они присутствуют у каждой кошки и являются частью их генома; таким образом, они передаются по наследству, но сами по себе обычно не образуют инфекционных или патогенных вирусов. С диагностической точки зрения важно использовать такие тесты ВЛК, которые могут отличать экзогенный ВЛК от эндогенных ВЛК-подобных последовательностей; это особенно касается молекулярных анализов [20–22].
ВЛК в больших количествах выделяется со слюной [23–25], его также можно обнаружить в фекалиях, моче и молоке [25–28]. ВЛК нестабилен в окружающей среде, и поэтому считается, что передача инфекции обычно требует тесного дружеского или агрессивного контакта между инфицированными и свободными от вируса кошками [2; 15; 29]. Непрямого контакта со слюной или, в меньшей степени, с фекалиями кошек, инфицированных ВЛК, также может быть достаточно для передачи инфекции (например, приём пищи и воды из общих мисок, взаимный груминг и совместное использование кошачьих лотков) [28–30]. Кроме того, ВЛК может передаваться вертикально — от инфицированной матери котятам.
Проникновение ВЛК обычно начинается в слизистой оболочке ротоглотки. Затем репликация вируса происходит в соседних миндалинах и местных лимфатических узлах [31; 32]. Вирус распространяется по всему организму через инфицированные лимфоциты и моноциты в лимфоидной ткани (первичная виремия). Репликация в костном мозге [33], которая включает инфицирование предшественников нейтрофилов и тромбоцитов, приводит к инициации вторичной виремии и системной инфекции [31; 32].
ВЛК подвержены кошки всех возрастов. Однако котята более склонны к развитию прогрессирующей инфекции ВЛК, чем взрослые кошки [34; 35]. Взрослые кошки, тем не менее, также могут ею страдать [36].
Прогрессирующая инфекция ВЛК
У кошек с прогрессирующей инфекцией поражение костного мозга приводит к возникновению вторичной (и персистирующей) виремии, при которой гранулоциты и тромбоциты, а также лимфоциты и моноциты в периферической крови инфицированы ВЛК (илл. 1) [33; 37]. Прогрессирующая инфекция характеризуется персистирующей виремией/антигенемией и отсутствием эффективного специфического иммунного ответа к ВЛК [34; 35]. Другими словами, вирус постоянно одерживает верх (илл. 2). Кошки с прогрессирующей инфекцией ВЛК выделяют большое количество частиц ВЛК и представляют опасность заражения для других кошек, их выявление наиболее важно как с клинической, так и с эпидемиологической точки зрения. Их следует содержать отдельно от компаньонов, инфицированных ВЛК, независимо от состояния здоровья последних.
Прогрессирующая инфекция обычно подтверждается повторным тестированием кошки на антигенемию с интервалом в несколько недель или месяцев [2; 7; 38]; только повторные положительные результаты теста на антиген подтверждают наличие прогрессирующей инфекции (илл. 1). Примечательно, что у некоторых кошек развитие прогрессирующей инфекции ВЛК может занять несколько недель после первоначального контакта с ВЛК (илл. 3; например, кошки 6 и 11) и/или у кошек могут быть чередующиеся отрицательные и положительные результаты теста на антиген p27 (здесь и далее называемые просто «чередующимися»), особенно во время ранней инфекции, прежде чем баланс вирус/хозяин установится (см. илл. 2 и 3, кошки 6, 7, 8, 11, 12, 13 и 15).
У кошек с прогрессирующим течением прогноз хуже, чем у кошек с регрессирующей инфекцией ВЛК (таблица 1). Они подвержены высокому риску заражения потенциально смертельными заболеваниями, связанными с ВЛК, иногда в течение всего нескольких месяцев (илл. 3, кошка 14) [4–8; 15; 41]. Тем не менее, многие кошки с прогрессирующей инфекцией продолжают жить здоровой и счастливой жизнью в течение многих лет, если за ними хорошо ухаживать.
Регрессирующая инфекция ВЛК
У кошек с регрессирующей инфекцией (таблица 1) развился частично эффективный противовирусный иммунный ответ [31; 38; 39; 42; 43], и они выздоровели от первичной виремии (илл. 2). У большинства регрессивно инфицированных кошек костный мозг не инфицирован (как и предшественники нейтрофилов и тромбоцитов), и поэтому у них выявляются только лимфоциты и иногда моноциты, которые являются провирусными, и вирусная РНК обычно не обнаруживается в клетках периферической крови [37].
Клиренс антигенемии наблюдается в основном в течение 1–12 недель [40]; в редких случаях это может занять много месяцев (илл. 3, кошка 4) [40], хотя вероятность клиренса виремии со временем уменьшается. Иногда результаты могут наблюдаться у кошек, не следующих определённым курсам заражения ВЛК; некоторые из этих кошек могут временно давать отрицательный результат после положительного результата во время начальной антигенемии, а затем могут стать устойчиво положительными по мере прогрессирования инфекции (илл. 3, кошки 6, 7 и 11) [39; 40]. Клиренс ВЛК-виремии определяется балансом между иммунной системой кошки и вирусом (илл. 2) и может зависеть от многих факторов, таких как возраст и иммунный статус кошки, сопутствующие стрессоры, сопутствующие инфекции, конкретный изолят вируса и уровень воздействия. Чтобы определить, развивается ли у кошки с первоначальным положительным результатом теста на антиген ВЛК регрессивная или прогрессирующая ВЛК-инфекция, необходимо повторное тестирование на антиген ВЛК (у кошек с регрессирующей инфекцией в конечном итоге результат антиген-отрицательный, в то время как при прогрессирующей инфекции — антиген-положительный). У кошек с регрессирующей инфекцией обычно не развивается заболевание, связанное с ВЛК, хотя у некоторых была описана лимфома или угнетение костного мозга [44; 45].
На ранних стадиях после заражения ВЛК нет различий в нагрузках вирусной РНК и вирусной РНК в плазме, определяемых с помощью ПЦР в реальном времени и ОТ-ПЦР в реальном времени, между кошками с различными исходами инфекции (т. е. регрессирующей или прогрессирующей инфекцией) [6]. Таким образом, на очень ранних этапах после воздействия ВЛК провирусные нагрузки ВЛК или вирусные РНК в плазме не могут быть использованы для дифференцировки регрессивной от прогрессирующей инфекции. Однако через несколько недель после воздействия ВЛК у кошек с регрессирующей инфекцией уровни вирусной РНК в крови и плазме ниже, чем у кошек с прогрессирующей [4; 20; 38; 46; 47]. Поэтому, как только инфекция ВЛК установлена окончательно, можно использовать провирусные и вирусные нагрузки РНК, чтобы помочь отличить прогрессирующую инфекцию от регрессирующей. В полевых условиях, учитывая, что обычно невозможно определить, на какой стадии находится кошка, ВЛК-инфицированная естественным образом, одних только нагрузок провирусной и вирусной РНК плазмы в один момент времени недостаточно, чтобы определить, имеет ли кошка прогрессирующую или регрессирующую инфекцию. Поэтому рекомендуется повторное тестирование через 1–2 месяца, чтобы чётко определить течение инфекции.
После выздоровления от антигенемии во время регрессирующей инфекции размножающийся вирус всё ещё может быть реактивирован в течение нескольких месяцев и, возможно, до нескольких лет [36; 48–50] путём культивирования клеток костного мозга в присутствии высоких доз глюкокортикоидов (тестирование на латентность; обратите внимание, что с момента введения ПЦР на провирус ВЛК культивирование клеток костного мозга обычно больше не проводится). Способность вируса к реактивации (рецидив виремии и выделение вируса) при иммуносупрессивных дозах глюкокортикоидов [50; 51] наглядно демонстрирует, что вирус просто контролируется иммунной системой кошки и не элиминирует полностью. С помощью ПЦР провирус ВЛК может быть обнаружен в периферической крови или костном мозге кошек с регрессирующей инфекцией (носителей провируса ВЛК) [20; 38], а РНК вирусной плазмы может обнаруживаться или не обнаруживаться с помощью ОТ-ПЦР в реальном времени [46; 47; 52].
Потенциал реактивации уменьшается по мере увеличения времени с момента воздействия (илл. 1), а также зависит от баланса между иммунной системой хозяина и вирусом (илл. 2). У кошек с регрессивной инфекцией ВЛК может реактивироваться in vivo, если, например, у кошки по какой-либо причине ослаблен иммунитет [50; 51; 53]. Кошка больше не способна подавлять репликацию вируса, рецидивирует антигенемия/виремия, кошка выделяет вирус, а также может развиться заболевание, связанное с ВЛК [53]. Имеются некоторые доказательства того, что кошки с регрессирующей инфекцией и с положительной РНК вируса в плазме имеют более высокую вероятность реактивации вируса, чем кошки с отрицательной РНК вируса в плазме [6]. При регрессирующей инфекции кошки, вероятно, никогда не избавляются от заражения ВЛК полностью [4]; однако провирусная нагрузка может быть очень низкой и может (по крайней мере, временно) опускаться ниже предела обнаружения, в зависимости от чувствительности используемой ПЦР на провирус ВЛК.
 |
| Илл. 2. Полезно поразмышлять о результатах заражения вирусом кошачьей лейкемии (ВЛК) с точки зрения баланса весов, на одной чаше которых иммунный ответ кошки, а на другой — вирус. При абортивной инфекции ВЛК кошка имеет преимущество (её чаша перевешивает); при прогрессирующей инфекции ВЛК более весомым оказывается вирус. При регрессирующей инфекции иммунная система кошки может сдерживать вирус, чтобы не допустить никакой его репликации или позволить только очень ограниченную, однако не исключена реактивация (рецидив виремии и выделение вируса). При очаговой инфекции (редко) иммунная система кошки удерживает репликацию вируса в пределах определённых тканей. Для каждого исхода инфекции (абортивный, регрессирующий, очаговый и прогрессирующий) показана величина иммунитета против ВЛК (розовый), интеграция провируса (синий), репликация вируса (серо-зелёный) и способность вызывать заболевание, связанное с ВЛК (серый). Три графы с градуированным цветом указывают на возможность положительного или отрицательного статуса |
Абортивная инфекция ВЛК
Существует группа кошек, организм которых ограничивает заражение ВЛК до интеграции провируса. Все прямые методы обнаружения ВЛК отрицательны (тесты на антиген ВЛК, провирус и вирус), и ответы антител являются единственным признаком предыдущего воздействия ВЛК (таблица 1 и илл. 1). Только недавно первый рутинный тест на антитела к ВЛК стал коммерчески доступным; однако пока нет достаточных данных о том, надёжно ли этот тест выявляет кошек с абортивной инфекцией ВЛК в полевых условиях. При абортивной инфекции кошки обладают сильным иммунитетом к ВЛК (илл. 2) и, как правило, испытывают лишь низкий уровень воздействия вируса [28; 30; 38]. Из различных исходов инфекции это наиболее благоприятный для кошки — баланс склоняется в её пользу (илл. 2). Абортивная инфекция может быть экспериментально вызвана у кошек воздействием только очень небольшого количества вируса (например, непрямой передачей через фекалии) [28; 30].
Очаговая (локализованная или атипичная) инфекция ВЛК
У некоторых кошек в крови может присутствовать свободный вирусный антиген (антиген-положительный), но не инфекционный вирус (выделение вируса — отрицательное) [54–56]. В более ранних исследованиях эти кошки были описаны как «диссонирующие кошки» [54–57]. Если антигенемия при отсутствии реплицирующегося вируса в периферической крови сохраняется годами, это может быть вызвано так называемой очаговой (локализованной или атипичной) ВЛК-инфекцией, при которой иммунная система кошки удерживает репликацию вируса, изолируя в определённых тканях, таких как селезёнка, лимфатические узлы, тонкая кишка, мочевыводящие пути или молочные железы [26; 56; 58]. Выработка и высвобождение свободного антигена ВЛК p27 в кровь (но отсутствие или только минимальное высвобождение инфицированных клеток с интеграцией провируса) у этих кошек могут быть прерывистыми или низкоуровневыми (таблица 1).
Кошки с очаговой инфекцией ВЛК встречаются редко и, вероятно, не представляют серьёзной эпидемиологической проблемы, но такой исход инфекции может привести к запутанным проявлениям инфекции ВЛК и запутанным результатам теста ВЛК. Хорошо документирован один случай очаговой инфекции у племенной самки, у которой вирус был изолирован в молочных железах; во время фазы отрицательных результатов теста на свободный антиген ВЛК p27 в крови она передала вирус котятам через молоко [26; 59]. Очаговые инфекции с противоречивыми результатами тестов регистрировались в экспериментальных условиях [58; 60; 61] и также наблюдались у 10% кошек, естественно инфицированных ВЛК [26; 56; 57; 59; 62]. В одном исследовании около трети кошек с несоответствующими результатами теста ВЛК были ПЦР-положительными на провирус, и предполагалось, что у этих кошек был заражён костный мозг [58].
Наконец, есть некоторые кошки с противоречивыми или чередующимися результатами тестов на ранней стадии ВЛК-инфекции.
Таблица 1. Характеристика возможных исходов заражения вирусом кошачьей лейкемии (ВЛК) и результатов анализов, определяющих их
Таблица 2. Особенности методов выявления вируса лейкоза кошек (ВЛК)
Ключевые особенности инфекции ВЛК: кошки с антигенемией, выделяющие вирусы и носители провирусов
С клинической и эпидемиологической точки зрения приоритетной задачей является определение того, есть ли у кошки вирусемия/антигенемия (т. е. является ли она источником вируса) и имеет ли она прогрессирующую или регрессивную инфекцию (таблица 1 и илл. 1). В последние годы спектр методов, доступных для решения этих вопросов, изменился.
Кошки с антигенемией
Антигенемия (наличие свободного антигена капсида p27 ВЛК в крови, плазме или сыворотке) в течение многих лет была наиболее часто применяемым маркером инфекции ВЛК. У большинства кошек антигенемия является показателем виремии (то есть вируса, способного к репликации, обнаруживаемого в культуре клеток с помощью выделения вируса). Однако были описаны некоторые несоответствующие антигенемические, но авиремические кошки; как обсуждалось, противоречивые результаты в основном наблюдаются на ранней стадии инфекции ВЛК или при очаговой инфекции ВЛК (см. также таблицу 1 и выше) [26; 54–60; 62].
Выявление виремии (путём вирусовыделения) является трудоёмким и доступно только в специализированных лабораториях (таблица 2). Напротив, антигенемию можно легко обнаружить на месте оказания медицинской помощи с помощью экспресс-тестов (POC) или лабораторно с помощью количественного ИФА на плашках. Экспресс-тесты, которые обнаруживают свободный антиген ВЛК p27, основаны на ИФА, других иммунохроматографических анализах или анализах быстрой иммуномиграции и доступны у нескольких производителей [63–70]. Некоторые из этих тестов предпочтительно проводить с сывороткой или плазмой, поскольку в некоторых исследованиях цельная кровь приводит к более высокому уровню ложноположительных результатов, особенно когда образец подвергался гемолизу [71]. Некоторые ИФА на основе пластинок могут давать количественную нагрузку антигена или контроль потенциально мешающих факторов, таких как кошачьи анти-мышиные антитела [63; 72]. Диагностические показатели большинства тестов POC, как правило, хорошие, хотя их чувствительность и специфичность могут незначительно отличаться в зависимости от страны производства и применения [64–70]. Ни один из текущих тестов на антиген p27 не должен использоваться для анализа образцов слюны, поскольку это позволит пропустить некоторых инфицированных кошек [73; 74].
Некоторые специализированные лаборатории предлагают ОТ-ПЦР для выявления вирусной РНК, например, в слюне инфицированных кошек. Обнаружение вирусной РНК методом ОТ-ПЦР в слюне обычно хорошо коррелирует с обнаружением антигена в крови инфицированных кошек [23; 24]. Хотя отправка образца для ОТ-ПЦР в специализированную лабораторию требует больше времени и затрат, её преимущество в том, что РНК вируса ВЛК в слюне, а также в крови можно обнаружить уже через 1 неделю после воздействия ВЛК (т. е., по крайней мере, за 2 недели до обнаружения антигена р27 в крови; таблица 2) [27].
 |
| Илл. 3. Примеры свободного антигена p27 и провируса у 15 кошек, инфицированных ВЛК, с различными (в некоторых исключительных случаях) курсами заражения ВЛК. Все кошки были экспериментально заражены одним и тем же штаммом вируса (ВЛК-A/Glasgow-1) [20; 36; 39; 40]. Не все результаты доступны во все моменты времени: ранние исследования предшествовали введению ПЦР-анализа на провирус ВЛК [36; 40], и долгосрочному наблюдению были доступны не все кошки. Из представляющих регрессирующую инфекцию ВЛК кошки 2, 3, 8, 12, 13 и 15 перенесли транзиторную виремию. Повторное тестирование на антиген p27 и количественная оценка провирусной нагрузки могут помочь предсказать окончательный исход инфекции ВЛК у отдельной кошки. Реактивация относится к рецидиву виремии и выделению вируса у ранее ВЛК p27 антиген-негативных (авиремических) кошек |
Кошки, выделяющие ВЛК
Случаи выделения ВЛК имеют эпидемиологическое значение, поскольку они представляют риск заражения для кошек, свободных от ВЛК. Любая кошка с прогрессирующей ВЛК-инфекцией и регрессивно инфицированные кошки, которые являются антиген-положительными (т. е. на ранней стадии регрессивной инфекции или после реактивации), должны рассматриваться как ВЛК-выделяющие (илл. 1).
Было показано, что существует отличное соответствие между антигенемией (свободный антиген ВЛК p27 в крови) и наличием вирусной РНК в слюне [23; 24]. Таким образом, выделения ВЛК могут быть обнаружены путём тестирования на антиген ВЛК p27 в крови или путём тестирования на вирусную РНК в слюне с использованием ОТ-ПЦР; последний тест даёт положительный результат на ранней стадии и, таким образом, может быть полезен для диагностики при подозрении на очень раннюю инфекцию (таблица 2) [27].
Забор слюны и ОТ-ПЦР-тестирование также могут быть использованы в среде с несколькими кошками для подтверждения отсутствия ВЛК в популяции. Было показано, что одна положительная кошка среди объединённых образцов слюны от 30 вирус-негативных кошек всё равно даст положительный результат ОТ-ПЦР, хотя из-за эффекта разбавления происходит потеря чувствительности анализа [23]. Таким образом, в полевых условиях рекомендуется объединение не более 10 образцов. Объединение образцов может быть выполнено в определённых специализированных лабораториях (рекомендуется предварительное расследование). Обратите внимание, что тестирование объединённых образцов не подходит для домашних хозяйств с известными кошками, инфицированными ВЛК.
(Окончание в следующем номере)
СВМ № 5/2022
Вам также могут быть интересными статьи: