Все
Издания
Телеграм
Карта зообизнеса
Профиль
FHV-1 — возбудитель вирусного ринотрахеита кошек. Хотя серин/треонин-киназа (pK) и тимидинкиназа (TK) давно рассматриваются как факторы вирулентности альфагерпесвирусов, до сих пор оставалось неясным, через какие клеточные сигнальные сети они влияют на репликацию вируса и его клеточную передачу. В этой связи учёные из Харбинского научно-исследовательского института ветеринарии Китайской академии сельскохозяйственных наук и Колледжа ветеринарной медицины Северо-Восточного аграрного университета решили изучить, как делеции pK и TK изменяют фосфорилирование белков клетки-хозяина и связанные с этим механизмы вирусной репликации.
С помощью технологии CRISPR/Cas9 были получены мутанты FHV-1 с удалёнными генами pK и TK. Репликацию вируса и размеры бляшек оценивали в культуре клеток F81. Для анализа изменений фосфорилирования применяли DIA-фосфопротеомику с последующим анализом по Gene Ontology (GO) и базе путей Kyoto Encyclopedia of Genes and Genomes (KEGG), сравнивая инфицирование мутантными штаммами и «диким» типом вируса.
По словам исследователей, удаление pK значительно сильнее снижало репликативную способность FHV-1 по сравнению с удалением TK: pK-дефицитный вирус формировал более мелкие бляшки и медленнее поражал клетки.
Фосфопротеомный анализ показал принципиально разные молекулярные профили для двух мутантов. При отсутствии pK наиболее выраженные изменения затрагивали белки сплайсосомы — в частности регуляторы сплайсинга Ess-2 и CDK13, для которых было зарегистрировано снижение уровня фосфорилирования. По мнению исследователей, это указывает на нарушение механизмов посттранскрипционной регуляции в клетке-хозяине.
В случае TK-дефицитного вируса, напротив, доминировали изменения в путях АТФ-зависимого ремоделирования хроматина. Было отмечено перераспределение фосфорилирования факторов SMARCA5 и RSF1, связанных с регуляцией доступности хроматина и транскрипционной активности.
Исследователи отмечают, что pK и TK регулируют репликацию FHV-1 через различные клеточные сети: pK — преимущественно через контроль процессов сплайсинга и экспрессии генов, TK — через эпигенетическую организацию хроматина. Эти данные расширяют представления о патогенезе FHV-1 и могут рассматриваться как основа для поиска новых противовирусных мишеней, а также для культивирования ослабленных вариантов вируса.
Источник: mdpi.com
