Поиск
Главная » Без рубрики » Исследование влияния вируса лейкоза кошек на продолжительность их жизни: анализ цельной крови повышает уровень выявления кошек с наличием вируса в низких титрах

Исследование влияния вируса лейкоза кошек на продолжительность их жизни: анализ цельной крови повышает уровень выявления кошек с наличием вируса в низких титрах

В статье проанализировано, какой биоматериал — цельная кровь, плазма или сыворотка, полученные при первичной диагностике, — наиболее подходит для первичного скрининга на антиген FeLV. Исследователи стремились выявить оптимальные типы проб для диагностики инфекции у кошек и найти факторы, связанные с длительным выживанием животных.
влияние вируса лейкоза кошек на продолжительность жизни

Melissa J Beall1, Dana Moore2, Sean Turner1 and Julie K Levy2
1 IDEXX Laboratories, Westbrook, ME, USA
2 Shelter Medicine Program, College of Veterinary Medicine, University of Florida, Gainesville, FL, USA

Введение

Программы по развитию ветеринарной медицины в приютах сыграли ведущую роль в демонстрации возможности пристройства кошек с вирусом иммунодефицита кошек (FIV) или вирусом лейкоза кошек (FeLV) [1; 2]. Пристройство FIV-положительных кошек практикуется уже много лет благодаря длительному периоду бессимптомного течения инфекции и минимальному риску передачи инфекции другим кошкам, живущими с ними в одном доме [3]. В последнее время участились случаи пристройства кошек с FeLV, несмотря на более высокий риск развития заболевания и сокращение продолжительности жизни [2]. Помимо этого, у недавно приобретённых или уже имеющихся в доме кошек может быть диагностирован FeLV при плановом ветеринарном обследовании или тестировании в связи с заболеванием либо контактом с FeLV. Было показано, что кошки с FeLV-инфекцией живут дольше при содержании в одиночестве или с малым количеством других кошек, а не в больших семьях с множеством кошек или приютах для бездомных животных [4]. Предположительно, это связано со снижением стресса и/или воздействия сопутствующих патогенов, однако характер течения FeLV-инфекции также является важным фактором [4]. У кошек с прогрессирующей формой инфекции наблюдается активная репликация вируса и низкий уровень иммунного ответа. У них чаще отмечается низкая выживаемость и риск развития FeLV-ассоциированных заболеваний в течение нескольких лет после заражения [5; 6]. В противоположность этому, кошки с низким или неопределяемым уровнем антигена p27 FeLV и/или низкой или неопределяемой нагрузкой провирусной ДНК в крови, как правило, имеют регрессирующее или фокальное клиническое течение FeLV-инфекции [5; 6]. Регрессирующая и фокальная инфекции вызывают иммунный ответ, но не элиминируют вирус полностью, поскольку ретровирус способствует интеграции вирусных генов в геном инфицированных лейкоцитов кошки или гемопоэтических клеток-предшественников костного мозга [7]. По данным экспериментальных исследований, кошки с регрессирующей и фокальной инфекциями обычно демонстрируют более длительную выживаемость, чем кошки с прогрессирующей инфекцией [8; 9]. Таким образом, знание ретровирусного статуса кошки является неотъемлемым компонентом её анамнеза и приобретает всё большее значение, поскольку всё больше кошек с ретровирусными инфекциями пристраиваются в новые семьи, а не подвергаются эвтаназии [10].

Данная работа началась в 2016 году с совместного исследования с приютом для животных Austin Pets Alive! (APA!) и их программой пристройства FeLV-положительных кошек [2;11]. Авторы изучали, какие типы диагностических тестов наиболее полезны для скрининга на FeLV и какая комбинация тестов может дать представление о долгосрочной выживаемости. Всего было зарегистрировано 127 кошек с FeLV-положительным результатом, первоначально выявленных путём скрининга с использованием комбинированного теста SNAP на FIV/FeLV (SNAP Combo FeLV Ag/FIV Antibody Test Kit for Cats, IDEXX Laboratories) в приюте. Они были включены в исследование, и им ежемесячно в течение 6 месяцев проводили четыре различных диагностических теста на FeLV [11]. На основании результатов количественного ИФА в микроплашках для определения антигена p27 FeLV (PetChek) и количественной ПЦР (qPCR) на содержание провирусной ДНК при включении в исследование (0-й месяц), кошки, инфицированные FeLV, были классифицированы как «высокоположительные» или «слабоположительные». Значимая разница в выживаемости между группами высокоположительных и слабоположительных кошек была очевидна при наблюдении в течение 4 лет [11]. В настоящей статье авторы рассмотрели вопрос о выборе типа проб, используемых для первичного скрининга на антиген FeLV, сравнивая цельную кровь, плазму и сыворотку, взятые на момент первоначальной диагностики [6; 12;13]. Целью исследования было определение оптимальных типов проб для выявления кошек, инфицированных FeLV, а также предикторов долгосрочной выживаемости в исходной когорте из 127 животных с положительным результатом на вирус лейкоза кошек, за которыми наблюдали в течение 8 лет с момента постановки диагноза.

Материалы и методы

Настоящее исследование проводилось в сотрудничестве с приютом для животных APA! (Остин, Техас). Популяция, дизайн исследования, методы тестирования и определение пороговых значений были описаны ранее [11]. Исследование было одобрено Институциональным комитетом по содержанию и использованию животных Университета Флориды, Программа ветеринарной медицины приютов Мэдди (протокол 201909584, 10 июля 2016 г.).

Кошки

При поступлении в приют APA! каждую кошку проверяли на наличие антигена p27 FeLV с использованием стабилизированной ЭДТА цельной крови и теста SNAP (комбинированный тест SNAP на FIV/FeLV; IDEXX Laboratories). Кошки с положительным результатом считались подходящими для включения в исследование, если они были в возрасте не менее 8 недель, весили не менее 2 фунтов (0,9 кг) и были достаточно социализированы, чтобы их можно было брать на руки без стресса для животного. Для всех кошек анализирование результатов исследования обычно проводилось в период от 2 недель после получения положительного результата скринингового теста и до 1 года. Кошек, участвовавших в исследовании, передавали в приёмные семьи и затем официально пристраивали после завершения первого этапа тестирования, продолжавшегося 6 месяцев. Кошки исключались из исследования, если их темперамент не позволял проводить регулярные осмотры или забор крови с низким уровнем стресса.

Забор проб крови

На момент включения в исследование (0-й месяц) и ежемесячно в течение последующих 6 месяцев (1–6-й месяцы) у участников брали 3 мл цельной крови с антикоагулянтом ЭДТА и 1 мл цельной крови для получения сыворотки.

Методы тестирования

SNAP. Пробы цельной крови с антикоагулянтом ЭДТА и сыворотки хранили в холодильнике в приюте до отправки в IDEXX (IDEXX R&D). В течение 7 дней после сбора (в среднем через 5 дней) аликвоту стабилизированной антикоагулянтом цельной крови центрифугировали для получения плазмы, после чего цельную кровь, плазму и сыворотку тестировали с помощью SNAP на наличие антигена p27 FeLV и антител к FIV в соответствии с инструкциями производителя. Лабораторный персонал визуально интерпретировал результаты тестов без знания индивидуальных данных пациентов и предыдущих результатов анализов.

Количественная ПЦР в реальном времени. Аликвоту стабилизированной антикоагулянтом цельной крови направляли в референсную лабораторию для количественной ПЦР в реальном времени (FeLV Quant RealPCR Test; IDEXX Laboratories) для выявления провирусной ДНК FeLV [14]. Если реакция была положительной и количество копий провирусной ДНК FeLV составляло ≤ 4 × 105 копий/мл, нагрузка считалась низкой; если выше 4 × 105 копий/мл — высокой [11].

PetChek. Оставшуюся плазму, полученную из стабилизированной антикоагулянтом цельной крови, замораживали при –20 °C и резервировали для серийного тестирования методом иммуноферментного анализа на микроплашках для выявления антигена p27 вируса лейкоза кошек (FeLV Antigen by ELISA; IDEXX Laboratories). Этот ИФА вначале проводится с целью первоначальной диагностики и представляет собой скрининговый анализ для выявления положительных проб. После выявления положительные пробы тестируются по подтверждающему протоколу с нейтрализацией антигена для обеспечения высокой специфичности результатов ИФА. Концентрацию антигена p27 FeLV определяли количественно с помощью исследовательского алгоритма на основе результатов подтверждающего анализа [14; 15]. Если концентрация растворимого антигена p27 составляла ≤ 37,5 нг/мл, пробы обозначались как низкие; при концентрации выше 37,5 нг/мл — как высокие [11].

Классификация

Инфекционный статус кошки определяли по результату количественной ПЦР на провирусную ДНК FeLV в сочетании с качественными результатами ИФА PetChek на антиген p27 FeLV на момент включения в исследование (0-й месяц), как сообщалось ранее (таблица 1) [11]. Предыдущее исследование продемонстрировало сильную положительную корреляцию между количественными результатами концентрации антигена p27 FeLV и нагрузкой провирусной ДНК, и в тех редких случаях, когда два результата были дискордантными (один — высокого уровня, другой — низкого), для классификации использовался результат коммерческой количественной ПЦР. Таким образом, качественных (положительный или отрицательный) результатов PetChek было достаточно для классификации. Полученная схема классификации статуса предусматривала следующее: (1) высокоположительный: положительный результат PetChek и высокая нагрузка провирусной ДНК (высокий результат количественной ПЦР); (2) слабоположительный: низкая нагрузка провирусной ДНК (низкий результат количественной ПЦР) или провирусная ДНК не обнаружена (отрицательный результат количественной ПЦР), но PetChek положительный; и (3) скрытый/отрицательный: положительный тест на антиген p27 FeLV при скрининге в приюте, но отрицательный результат PetChek и количественной ПЦР на момент включения в исследование (0-й месяц). Это позволяло учитывать возможность наличия FeLV-инфекции с концентрацией антигена p27 и нагрузкой провирусной ДНК ниже уровня обнаружения в день отбора проб, в отличие от отсутствия инфекции, вызванного ложноположительным результатом скринингового теста.

положительный результат на антиген p27 вируса лейкемии кошек (FeLV

Выживаемость

После 6-месячного этапа тестирования кошки переводились на этап пожизненного мониторинга выживаемости. Сотрудники исследовательской группы связывались с владельцами кошек по электронной почте, телефону, через текстовые сообщения или по обычной почте каждые 3 месяца до сентября 2020 (через 3–4 года после включения в исследование), а затем каждые 6 месяцев до декабря 2024 года (через 7–8 лет после включения в исследование) и спрашивали, живут ли с ними курируемые кошки. Владельцев, у которых кошки больше не было, просили указать дату смерти или потери, уточнить, умерла кошка сама или была эвтаназирована, а таже предположить причину смерти. В качестве поощрения за продолжающееся участие и стимулирование предоставления информации о выживаемости использовали подарочные карты на 25 долларов США и игрушки для кошек стоимостью менее 10 долларов. Время выживаемости рассчитывалось как разница между датой смерти или последнего контакта и датой включения животного в исследование.

Визуализация данных и статистика

Визуализация данных выполнена с использованием Python 3.12.5 и пакета Matplotlib v3.8.4 (https://zenodo.org/records/10916799). С помощью метода Уилсона — Брауна были определены 95% доверительные интервалы (ДИ) для доли положительных результатов SNAP в зависимости от типа пробы для кошек с низким уровнем положительных результатов. Анализ Каплана — Майера с логарифмическим ранговым тестом и тест Крускала–Уоллиса с множественными сравнениями использовали для оценки различий во времени выживаемости между кошками с высокоположительным, слабоположительным и скрытым/отрицательным инфекционным статусом. Статистический анализ проводили с использованием GraphPad Prism 10 для Mac OS версии 10.4.2 (534, 29 марта 2025 г.). Статистическую значимость оценивали при P < 0,05. Данные о кошках, выбывших из исследования, были подвергнуты проверке и оценке на момент последнего контакта с новыми владельцами.

Результаты

Включение в исследование

При поступлении в приют 127 кошек изначально имели положительный результат теста SNAP на вирус лейкоза кошек [11]. На момент включения в исследование (0-й месяц) у 121 из 127 кошек был выявлен положительный результат на антиген p27 вируса лейкоза кошек в тесте SNAP с использованием цельной крови, антикоагулянтом которой служила ЭДТА, также положительный результат дали 113/121 проб плазмы и 109/121 — сыворотки (илл. 1). Шесть проб были положительными на FeLV по SNAP только при использовании цельной крови, причём 3/6 положительных только по цельной крови проб были подтверждены с помощью количественной ПЦР (n = 1) или PetChek (n = 2). Кроме того, одна кошка, которая показала в SNAP положительный результат на антиген p27 FeLV со стабилизированной антикоагулянтом цельной кровью при скрининге в приюте, но отрицательный при включении в исследование (0-й месяц), была положительной по количественной ПЦР на FeLV с низкой нагрузкой провирусной ДНК на 0-й месяц (кошка APA016).

кошек теста SNAP

У всех 127 FeLV-позитивных кошек, которые были включены в исследование, инфекционный статус был классифицирован в соответствии с результатами анализа на антиген PetChek p27 и нагрузками провирусной ДНК qPCR на 0-м месяце [11]. В общей сложности 90 (71%) кошек были определены как высокоположительные, 29 (23%) кошек — как слабоположительные и 8 (6%) кошек классифицированы как скрытые/отрицательные по FeLV-статусу [16]. Тестирование стабилизированной антикоагулянтом цельной крови с помощью SNAP на месяц 0 выявило на пять и девять FeLV-инфицированных слабоположительных кошек больше, чем при тетировании плазмы или сыворотки соответственно. В цельной крови было обнаружено 28/29 (97%, 95% ДИ 83–99), плазме — 23/29 (79%, 95% ДИ 62–90), в сыворотке — 19/29 (66%, 95% ДИ 47–80), что свидетельствует о статистически значимо более высокой чувствительности цельной крови по сравнению с сывороткой.

Высокоположительные кошки

У кошек с высоким уровнем позитивности результаты тестов, полученные с помощью разных методов, в течение 6 месяцев исследования в целом совпадали, в том числе стабильно положительные результаты SNAP при использовании всех трёх типов проб (илл. 2). Только у 7/90 и 1/90 кошек с высоким уровнем позитивности при последующем ежемесячном тестировании была выявлена низкая нагрузка провирусной ДНК, и ни у одной из них результат количественной ПЦР не был отрицательным.

SNAP, PetChek и количественной ПЦР
Илл. 2. Результаты тестов SNAP, PetChek и количественной ПЦР для двух кошек с высоким положительным результатом. К кошкам с высоким положительным результатом относятся животные, у которых на момент скрининга был выявлен антиген p27 в тесте SNAP, а на момент включения в исследование (0-й месяц) — положительный результат кПЦР с высокой провирусной нагрузкой. У кошек с высоким положительным результатом стабильно наблюдались положительные результаты тестов, в том числе высокий уровень антигена p27 в тесте PetChek и провирусной ДНК в количественной ПЦР почти во всех контрольных точках. У кошек с высоким положительным результатом не наблюдалось различий в результатах теста SNAP. Ключ к расшифровке результатов показан в белом сегменте. Результаты SNAP для цельной крови (WB), плазмы и сыворотки показаны слева направо во внешнем кольце (светло-серого цвета) для каждого месяца тестирования по часовой стрелке. Результаты обозначаются как положительные (+) или отрицательные (–). В среднем кольце диаграммы (средне-серого цвета) показаны результаты PetChek, которые обозначаются как высокие (H), низкие (L) или отрицательные (–). Внутреннее кольцо (тёмно-серое) содержит результаты количественной ПЦР (qPCR), которые обозначаются как высокие (H), низкие (L) или отрицательные (–) значения

Слабоположительные кошки

В группе слабоположительных кошек на момент включения в исследование 17/29 (59%) имели конкордантные положительные результаты теста SNAP при использовании стабилизированной антикоагулянтом цельной крови, плазмы и сыворотки при включении (APA047 и APA127 на илл. 3), что очень похоже на данные, полученные у кошек с высоким уровнем положительного результата. Слабоположительные кошки с конкордантными результатами по типам проб в SNAP также дали положительные результаты в PetChek (n = 7), количественной ПЦР на FeLV (n = 1) или в обоих тестах (n = 9), и это дополнительное тестирование было необходимо для их дифференциации от высокоположительных кошек. В отличие от которых, некоторые из слабоположительных кошек демонстрировали вариабельность результатов SNAP по типам проб в течение последующих 6 месяцев (APA127 на илл. 3). Из оставшихся 12/29 (41%) слабоположительных кошек 11 имели дискордантные результаты SNAP по типам проб при включении (0-й месяц) (APA084 на илл. 3). У девяти из этих кошек положительный результат был подтверждён тестом PetChek, у одной — методом количественной ПЦР на вирус лейкоза кошек, а у одной — обоими методами. У последней кошки с низким уровнем позитивности положительный результат был получен только в тесте SNAP при скрининге, а в тестеы qPCR — только при включении в исследование (APA016 на илл. 3).

вируса лейкоза кошек продолжительность жизни
Илл. 3. Результаты тестирования в SNAP, PetChek и количественной ПЦР (кПЦР) для четырёх кошек с низким уровнем положительного результата. К ним относятся животные, у которых на момент скрининга SNAP был выявлен антиген p27, а также либо положительный результат количественной ПЦР с низкой провирусной нагрузкой, либо отрицательный результат кПЦР и положительный результат теста PetChek на антиген p27 на момент включения в исследование (0-й месяц). У кошек с низким уровнем положительного результата наблюдались стабильные или нестабильные результаты тестов PetChek и кПЦР в разные периоды времени. У кошек с низким уровнем антител могут быть как совпадающие положительные результаты PetChek и количественной ПЦР, так и несовпадающие. У них могут быть совпадающие положительные результаты по цельной крови (WB), плазме и сыворотке в SNAP или различия в типах образцов в SNAP. Ключ к расшифровке результатов показан в белом сегменте, а результаты SNAP по WB, плазме и сыворотке — слева направо во внешнем кольце (светло-сером) для каждого месяца тестирования по часовой стрелке. Результаты обозначаются как положительные (+) или отрицательные (–). Среднее кольцо диаграммы (средне-серое) отображает результаты PetChek, которые обозначаются как высокие (H), низкие (L) или отрицательные (–). Внутреннее кольцо (тёмно-серое) содержит результаты количественной ПЦР (qPCR), которые обозначаются как высокие (H), низкие (L) или отрицательные (–)

Скрытые/отрицательные кошки

Из восьми кошек, классифицированных как скрытые/отрицательные, на момент включения в исследование три кошки были положительными в SNAP только со стабилизированной антикоагулянтом цельной кровью, и ни одна из них не была положительной в PetChek, кПЦР или ИФА на FeLV на 0-й месяц, несмотря на первоначальные положительные результаты SNAP на антиген FeLV при скрининге (илл. 4). Пять из этих кошек имели дополнительные положительные результаты при последующих тестах SNAP с цельной кровью в течение следующих 6 месяцев наблюдения. У всех кошек группы скрытых/отрицательных по крайней мере в одном из исследований с помощью иммуноферментного анализа PetChek был обнаружен антиген p27 вируса лейкоза кошек, но его количество было ниже предела количественного определения. Согласно диагностическим критериям анализа, эти результаты были признаны отрицательными (данные не представлены) [14]. У одной кошки в 1-м месяце был выявлен слабоположительный результат по антигену p27 в PetChek, и ни у одной из них не было обнаружено провирусной ДНК методом количественной ПЦР.

антиген p27 вируса лейкоза кошек
Илл. 4. Результаты тестов SNAP, PetChek и количественной ПЦР (qPCR) для двух кошек с скрытым/отрицательным статусом. Кошки с неопределенным статусом — это кошки, у которых на момент скрининга был выявлен положительный результат теста на антиген p27 SNAP и отрицательный результат теста на провирусную ДНК методом кПЦР, а также отрицательный результат теста PetChek на антиген p27 на момент включения в исследование (0-й месяц). У некоторых кошек со скрытым/отрицательным статусом результаты теста SNAP на антиген p27 в цельной крови (ЦК) менялись в течение 6 месяцев тестирования. Ключ к расшифровке результатов показан в белом сегменте. Результаты SNAP для белой крови, плазмы и сыворотки показаны слева направо во внешнем кольце (светло-серым цветом) для каждого месяца тестирования по часовой стрелке. Результаты обозначаются как положительные (+) или отрицательные (–). В среднем кольце диаграммы (средне-серым цветом) показаны результаты PetChek, которые обозначаются как высокие (H), низкие (L) или отрицательные (–). Внутреннее кольцо (темно-серое) содержит результаты количественной ПЦР (qPCR), которые обозначаются как высокие (H), низкие (L) или отрицательные (–) значения

Выживаемость

Выживаемость 127 кошек оценивалась путём опроса владельцев каждые 3–6 месяцев в течение 8 лет после постановки диагноза (ещё 4 года после предыдущего отчёта). В общей сложности 93 (73%) кошки умерли, а 28 (22%) были живы по состоянию на декабрь 2024 года. В группах с высоким и низким уровнем положительных результатов было по три кошки, которые выбыли из исследования из-за пропажи (три кошки) или потери связи с владельцем (три кошки). Общая медиана выживаемости для всей популяции кошек с положительным результатом на FeLV составила 2,8 года. Сохранялась статистически значимая разница (P < 0,0001) между сроками выживаемости высокоположительных, слабоположительных и скрытых/отрицательных кошек (илл. 5). Кошки в группе высокоположительных имели медиану выживаемости 1,4 года, при этом две (2%) кошки были всё ещё живы на момент данного отчёта.

Кривые выживаемости Каплана-Майера
Илл. 5. Кривые выживаемости Каплана-Майера для 127 кошек, положительных по вирусу лейкоза кошек, с распределением по группам: высокоположительные (n = 90; красный), слабоположительные (n = 29; синий) и скрытые /отрицательные (n = 8; зелёный). Статус каждой кошки был определён на основании результатов тестов, полученных на момент включения в исследование (0-й месяц). Вероятность выживаемости была статистически значимо ниже для высокоположительных кошек, чем для слабоположительных или скрытых/отрицательных кошек (P < 0,0001)

В противоположность этому, слабоположительные и скрытые/отрицательные кошки ещё не достигли медианы выживаемости: 19/29 (66%) и 7/8 (88%) кошек из этих двух групп соответственно были всё ещё живы. Несмотря на более короткую медиану выживаемости высокоположительных кошек, 26/90 (29%) кошек были всё ещё живы через 3 года и 13/90 (14%) прожили 5 лет или дольше. Распределение времени выживания по группам более чётко иллюстрирует отклонения в соответствующих группах (илл. 6). Статистически значимые различия были отмечены между медианой выживаемости высокоположительных и слабоположительных (P < 0,0001) либо скрытых/отрицательных (P = 0,0002) кошек. Статистически значимой разницы между медианой выживаемости слабоположительных и скрытых/отрицательных кошек обнаружено не было (P > 0,9999).

вирус лейкемии кошек исследования
Илл. 6. Распределение времени выживания по группам с высоким, низким и скрытым/отрицательным статусом у 127 кошек с положительным результатом на вирус лейкемии кошек. Горизонтальными линиями обозначена медиана для каждой группы. Медиана выживаемости у кошек с высоким статусом была значительно ниже, чем у кошек с низким или скрытым/отрицательным статусом

Обсуждение

Это исследование продемонстрировало удобство и высокую чувствительность использования цельной крови с антикоагулянтом в качестве типа пробы для скрининга с помощью экспресс-теста на антиген p27 FeLV (point-of-care) по сравнению с плазмой или сывороткой крови. Положительного результата с последующим проведением количественной ПЦР в реальном времени на провирусную ДНК FeLV было достаточно для классификации инфекционного статуса кошки как высокоположительного или слабоположительного, когда результат ПЦР был положительным. Если результат ПЦР был отрицательным, дополнительно выявить инфицированных кошек с низким уровнем вируса помог иммуноферментный анализ в микроплашках (PetChek) на антиген p27 [11]. Несмотря на то, что у кошек с высоким уровнем антител наблюдались стабильно положительные результаты при анализе стабилизированной антикоагулянтом цельной крови, плазмы и сыворотки, одного этого было недостаточно для классификации FeLV-инфекционного статуса кошки, поскольку у 17/29 (59%) кошек с низким уровнем антител при тестировании на момент включения в исследование наблюдалась такая же картина. В этом исследовании только слабоположительные и скрытые/отрицательные кошки демонстрировали дискордантные результаты между типами образцов на SNAP в течение 6-месячной фазы тестирования.

Результаты данного проспективного исследования пристроенных FeLV-инфицированных кошек показали, что средняя продолжительность жизни в целом составляет 2,8 года. При этом высокоположительные кошки имели самую короткую медиану выживаемости — 1,4 года, и только 2/90 кошек были, по имеющимся данным, живы спустя более 7 лет. У кошек с высоким уровнем антител этот показатель был самым низким — 1,4 года, и только 2 из 90 кошек были живы спустя более 7 лет. У кошек с низким уровнем антител средняя продолжительность жизни ещё не определена, 19 из 29 кошек всё ещё живы. Поскольку кошки были помещены в приют с уже имеющимися инфекциями, вызванными вирусом лейкоза кошек, продолжительность которых неизвестна, время выживания указано с момента включения в исследование, а не с момента заражения. Медианы выживаемости, зарегистрированные для естественно приобретённых FeLV-инфекций в исследовании с участием более 800 FeLV-положительных кошек и 7000 неинфицированных контрольных животных, подобранных по возрасту и полу, составили 2,4 года и 6,3 года соответственно [17].

У кошек с положительным результатом на вирус лейкоза кошек, участвовавших в этом исследовании, за 6 месяцев тестирования нечасто наблюдалось изменение статуса инфекции с «высокого» на «низкий». У кошек с «высоким» статусом результаты всегда были высокими, а у кошек с «низким» статусом — либо стабильно низкими, либо иногда отрицательными, что указывает на то, что в какой-то момент уровень провирусной ДНК или антигена p27 падал ниже уровня обнаружения. Нечастые изменения между «высоким» и «низким» статусом могут быть причиной того, что в нашем исследовании для прогнозирования выживаемости можно было использовать единую панель тестов. Согласно предыдущим отчётам об исследованиях эффективности вакцин, в которых использовались молекулярные методы для определения статуса инфицирования кошек вирусом лейкемии кошек, примерно через 8 недель после заражения у кошек устанавливался статус инфицирования, который сохранялся в течение последующих 2,5–3 лет [18–20]. Чем ниже была концентрация вирусной РНК и провирусной ДНК через 8 недель после заражения, тем дольше жили кошки [19]. Поскольку более низкие количества провирусной ДНК и антигена p27 могут опускаться ниже уровня обнаружения в этих анализах, слабоположительные кошки могут быть пропущены при однократном тестировании. Поскольку при использовании этих методов анализа небольшое количество провирусной ДНК и антигена p27 может не обнаруживаться, при однократном тестировании можно не выявить кошек с низким уровнем положительных результатов. В будущем можно будет рассмотреть возможность повторного тестирования здоровой кошки, недавно появившейся в доме [5], однако наше исследование не выявило конкретного интервала, в течение которого можно было бы выявить колебания в показателях слабоположительного статуса.

Кошек, у которых при экспресс-тестировании на антиген p27 FeLV в цельной крови с антикоагулянтом был положительный результат, но при этом отрицательный результат при иммуноферментном анализе в микроплашках или ПЦР, считали скрытыми/отрицательными, поскольку доказать отсутствие у кошки этой ретровирусной инфекции после получения положительного результата скрининга может быть непросто, а ложноположительные результаты возможны [8]. Обозначение «скрытый» было заимствовано из литературы по вирусу иммунодефицита человека (ВИЧ), поскольку оно указывает на необходимость использования сверхчувствительных методов для обнаружения антигена p24 ВИЧ или вирусной РНК у подтверждённых ВИЧ-инфицированных лиц [16]. Более широкое применение антиретровирусной терапии у лиц с ВИЧ повысило распознавание статуса «антиген p24 положительный/вирус отрицательный», когда вирусные нагрузки снижаются до неопределяемых уровней [21; 22]. Аналогичным образом, результаты «антиген p27 FeLV положительный/вирусная РНК или провирусная ДНК отрицательные» хорошо известны и были описаны у кошек с латентными/фокальными инфекциями [23–27]. Дискордантные результаты между антигеном p27 FeLV и провирусной ДНК были зарегистрированы у кошек с гематологическими заболеваниями (иммуноопосредованная гемолитическая анемия, первичное заболевание или поражение костного мозга) и системным воспалением [28; 29]. В этом исследовании расхождения чаще всего наблюдались у здоровых, слабоположительных кошек, что делает перекрёстную реактивность, вызванную разрушением эритроцитов или эндогенную экспрессию гена gag FeLV маловероятной причиной ложноположительных результатов, как предполагалось ранее [29]. Некоторые слабоположительные кошки были SNAP-положительными по всем трём типам проб и стабильно положительными по PetChek, но при этом были изначально отрицательными по кПЦР, однако позднее показали положительный результат на провирусную ДНК, что указывает на истинную экзогенную FeLV-инфекцию. Возможно, это говорит о том, что количественная ПЦР давала ложноотрицательные результаты при некоторых тестированиях, несмотря на использование широко распространённого метода [15]. Однако исследования в области диагностики ВИЧ показали, что антиген p24 может быть обнаружен в эритроцитах с помощью иммуноферментного анализа даже при неопределяемой вирусной нагрузке в плазме крови. Это позволяет предположить, что тесты на антигены могут давать истинно положительные результаты без молекулярного подтверждения. [22]. Наконец, несмотря на то что фокальные/атипичные инфекции описываются как редкие, на их долю приходится до 10% естественных заражений FeLV [6]. Это согласуется с данными о 29/127 (23%) кошек в нашем исследовании, которые были отнесены к группе с низким уровнем положительных результатов. В эту группу входят как кошки с регрессивным, так и с очаговым/атипичным клиническим течением заболевания, поскольку на регрессивные инфекции также приходится около 10% случаев естественного заражения [30].

Терминология, описывающая клиническое течение FeLV-инфекции (например, прогрессирующее, регрессирующее, фокальное), остаётся важной для понимания клинического состояния и патогенеза, в то время как классификация инфекционного статуса (например, слабоположительный, высокоположительный) облегчает интерпретацию диагностических результатов различных тестов. Выявление кошек со слабоположительным и даже скрытым/отрицательным статусом с их ожидаемо более длительной выживаемостью и риском сопутствующих заболеваний по мере старения крайне важно для переоценки их низкого либо высокого положительного статуса при возникновении заболевания в будущем. Если они не перешли в высокоположительный статус, то маловероятно, что у них имеет место прогрессирующее клиническое течение FeLV-инфекции. Нераспознавание таких слабоположительных и скрытых/отрицательных кошек может быть одной из причин, почему некоторые кошки с гематологическими заболеваниями показывают положительный результат на антиген p27 FeLV, но при этом не имеют признаков провирусной ДНК FeLV в крови или костном мозге и демонстрируют полное выздоровление при соответствующей терапии [28; 29; 31]. Реактивация очаговых (фокальных) FeLV-инфекций и развитие прогрессирующего заболевания по-прежнему вызывают опасения. Это было описано при экспериментальных FeLV-инфекциях, включая исследования, оценивающие эффективность вакцин [27; 32]. Именно поэтому важно повторно оценивать статус инфицирования у клинически больных кошек.

Ограничением данного исследования было то, что для тестирования на FeLV использовался только минимально инвазивный метод забора проб периферической крови. Более инвазивный метод забора тканей, таких как костный мозг или лимфоидная ткань, мог бы выявить вирус, скрывающийся в очагах инфекциях, или источник антигена либо провируса, обнаруживаемого в крови. В данном исследовании не оценивали вирусную РНК в слюне как показатель FeLV-инфекции ввиду недостаточной чувствительности у кошек с регрессирующими и предположительно фокальными инфекциями [33; 34]. Другим ограничением была невозможность выполнения дополнительного тестирования на FeLV на момент смерти или посмертного вскрытия для определения вирусной нагрузки в конце жизни или причины смерти. Таким образом, мы не смогли установить, перешли ли какие-либо умершие слабоположительные кошки в высокоположительный статус, или была ли смертность высокоположительных кошек обусловлена прогрессирующим клиническим течением заболевания.

Выводы

Это исследование продемонстрировало преимущества использования цельной крови с антикоагулянтом в экспресс-тесте для скрининга на наличие FeLV-инфекции по сравнению с сепарированной плазмой или сывороткой. Дополнительное тестирование с помощью количественной ПЦР в реальном времени на провирусную ДНК FeLV и иммуноферментного анализа в микроплашках для выявления антигена p27 FeLV позволило оценить вероятность длительной ремиссии. Знание актуальных рекомендаций по тестированию и ожидаемых исходов играет ключевую роль в лечении данных пациентов с ретровирусной инфекцией. Предоставление ветеринарным врачам прогностической информации помогает сформировать точные ожидания относительно продолжительности жизни у настоящих и потенциальных владельцев кошек, инфицированных вирусом лейкоза кошек. Описанные диагностические протоколы способствуют успешному пристройству, помогают принять решение о том, сколько кошек будет в доме, и подчёркивают важность регулярного ветеринарного обслуживания для ведения FeLV как хронического заболевания.


Литература
  1. Beczkowski PM, Litster A, Lin TL, et al. Contrasting clinical outcomes in two cohorts of cats naturally infected with feline immunodeficiency virus (FIV). Vet Microbiol 2015; 176: 50-60.
  2. Lockhart HL, Levy JK, Amirian ES, et al. Outcome of cats referred to a specialized adoption program for feline leukemia virus-positive cats. J Feline Med Surg 2020; 22: 1160-1167.
  3. Litster AL. Transmission of feline immunodeficiency virus (FIV) among cohabiting cats in two cat rescue shelters. Vet J 2014; 201: 184-188.
  4. Westman M, Norris J, Malik R, et al. The diagnosis of feline leukaemia virus (FeLV) infection in owned and group- housed rescue cats in Australia. Viruses 2019; 11. DOI: 10.3390/v11060503.
  5. Little S, Levy J, Hartmann K, et al. 2020 AAFP feline retro- virus testing and management guidelines. J Feline Med Surg 2020; 22: 5-30.
  6. Hofmann-Lehmann R and Hartmann K. Feline leukaemia virus infection: a practical approach to diagnosis. J Feline Med Surg 2020; 22: 831-846.
  7. Rojko JL and Olsen RG. The immunobiology of the feline leukemia virus. Vet Immunol Immunopathol 1984; 6: 107-165.
  8. Helfer-Hungerbuehler AK, Widmer S, Kessler Y, et al. Long-term follow up of feline leukemia virus infection and characterization of viral RNA loads using molecular methods in tissues of cats with different infection outcomes. Virus Res 2015; 197: 137-150.
  9. Hofmann-Lehmann R, Huder JB, Gruber S, et al. Feline leukaemia provirus load during the course of experimental infection and in naturally infected cats. J Gen Virol 2001; 82: 1589-1596.
  10. Dezubiria P, Amirian ES, Spera K, et al. Animal shelter management of feline leukemia virus and feline immunodeficiency virus infections in cats. Front Vet Sci 2022; 9. DOI: 10.3389/fvets.2022.1003388.
  11. Beall MJ, Buch J, Clark G, et al. Feline leukemia virus p27 antigen concentration and proviral DNA load are associated with survival in naturally infected cats. Viruses 2021; 13. DOI: 10.3390/v13020302.
  12. Westman ME, Malik R, Hall E, et al. Comparison of three feline leukaemia virus (FeLV) point-of-care antigen test kits using blood and saliva. Comp Immunol Microbiol Infect Dis 2017; 50: 88-96.
  13. Barr MC. FIV, FeLV, and FIPV: interpretation and misinterpretation of serological test results. Semin Vet Med Surg Small Anim 1996; 11: 144-153.
  14. Beall MJ, Buch J, Cahill RJ, et al. Evaluation of a quantitative enzyme-linked immunosorbent assay for feline leukemia virus p27 antigen and comparison to proviral DNA loads by real-time polymerase chain reaction. Comp Immunol Microbiol Infect Dis 2019; 67. DOI: 10.1016/j.cimid.2019.101348.
  15. Buch JS, Clark GH, Cahill R, et al. Analytical validation of a reference laboratory ELISA for the detection of feline leukemia virus p27 antigen. J Vet Diagn Invest 2017; 29: 654-659.
  16. 16 Simonetti FR. Low level viremia. Johns Hopkins POC-IT HIV Guide. https://www.hopkinsguides.com/hopkins/view/Johns_Hopkins_HIV_Guide/545309/all/Low_level_viremia (2022, accessed 2 October 2025).
  17. 17 Levy J, Lorentzen L, Shields J, et al. Long-term outcome of cats with natural FeLV and FIV infection [abstract]. 8th International Feline Retrovirus Research Symposium; 2006, October 8-11, Washington, DC.
  18. Cattori V, Tandon R, Pepin A, et al. Rapid detection of feline leukemia virus provirus integration into feline genomic DNA. Mol Cell Probes 2006; 20: 172-181.
  19. Hofmann-Lehmann R, Cattori V, Tandon R, et al. Vaccination against the feline leukaemia virus: outcome and response categories and long-term follow-up. Vaccine 2007; 25: 5531-5539.
  20. Torres AN, Mathiason CK and Hoover EA. Re-examination of feline leukemia virus: host relationships using realtime PCR. Virology 2005; 332: 272-283.
  21. Passaes C, Delagreverie HM, Avettand-Fenoel V, et al. Ultrasensitive detection of p24 in plasma samples from people with primary and chronic HIV-1 infection. J Virol 2021; 95. DOI: 10.1128/JVI.00016-21.
  22. Garcia MN, dos Ramos Farias MS, Avila MM, et al. Presence of p24-antigen associated to erythrocyte in HIV-positive individuals even in patients with undetectable plasma viral load. PLoS One 2011; 6. DOI: 10.1371/journal.pone. 0014544.
  23. Jarrett O, Pacitti AM, Hosie MJ, et al. Comparison of diagnostic methods for feline leukemia virus and feline immunodeficiency virus. J Am Vet Med Assoc 1991; 199: 1362-1364.
  24. 24 Lutz H, Pedersen NC and Theilen GH. Course of feline leukemia virus infection and its detection by enzyme-linked immunosorbent assay and monoclonal antibodies. Am J Vet Res 1983; 44: 2054-2059.
  25. Miyazawa T and Jarrett O. Feline leukaemia virus pro-viral DNA detected by polymerase chain reaction in anti- genaemic but non-viraemic (‘discordant’) cats. Arch Virol 1997; 142: 323-332.
  26. Pinches MD, Helps CR, Gruffydd-Jones TJ, et al. Diagnosis of feline leukaemia virus infection by semi-quantitative real-time polymerase chain reaction. J Feline Med Surg 2007; 9: 8-13.
  27. Rojko JL, Hoover EA, Quackenbush SL, et al. Reactivation of latent feline leukaemia virus infection. Nature 1982; 298: 385-388.
  28. Kornya M, Bienzle D and Beeler-Marfisi J. Discordant FeLV p27 immunoassay and PCR test results in 21 cats with hematologic disorders. J Feline Med Surg 2023; 25. DOI: 10.1177/1098612X231183297.
  29. Robert LI, Puig J, Tumbarello M, et al. A retrospective review of cats with suspected false positive results in point-of- care feline leukemia virus tests and concurrent immune- mediated anemia. J Am Vet Med Assoc 2023; 261: 1459-1465.
  30. Giselbrecht J, Jahne S, Bergman M, et al. Prevalence of different courses of feline leukaemia virus infection in four European countries. Viruses 2023; 15. DOI: 10.3390/ v15081718.
  31. Stutzer B, Muller F, Majzoub M, et al. Role of latent feline leukemia virus infection in nonregenerative cytopenias of cats. J Vet Intern Med 2010; 24: 192-197.
  32. Helfer-Hungerbuehler AK, Cattori V, Boretti FS, et al. Dominance of highly divergent feline leukemia virus A progeny variants in a cat with recurrent viremia and fatal lymphoma. Retrovirology 2010; 7. DOI: 10.1186/1742-46907-14.
  33. Gomes-Keller MA, Gonczi E, Tandon R, et al. Detection of feline leukemia virus RNA in saliva from naturally infected cats and correlation of PCR results with those of current diagnostic methods. J Clin Microbiol 2006; 44: 916-922.
  34. Gomes-Keller MA, Tandon R, Gonczi E, et al. Shedding of feline leukemia virus RNA in saliva is a consistent feature in viremic cats. Vet Microbiol 2006; 112: 11-21.

Источник: Journal of Feline Medicine and Surgery 1–10. © The Author(s) 2025. This article is distributed under the terms of the Creative Commons Attribution-NonCommercial 4.0 License (https://creativecommons.org/licenses/by-nc/4.0/) which permits non-commercial use, reproduction and distribution of the work without further permission provided the original work is attributed as specified on the SAGE and Open Access pages (https://us.sagepub.com/en-us/nam/open-access-at-sage).

СВМ № 3/2026

[wpforms id="189076" title="false"]

Мы знаем, что для вас важно получать актуальную информацию в удобном для вас виде и формате. Не забудьте подписаться на удобные для вас каналы Zooinform.ru

Разработка и продвижение сайтов webseed.ru