Новая тест-система для экспресс-диагностики панлейкопении кошек приблизилась по чувствительности к ПЦР

Быстрая и надёжная диагностика панлейкопении кошек остаётся одной из ключевых задач клинической практики, особенно на первичном приёме и при работе в отсутствие поблизости крупных лабораторий. Исследователи из Шэньчжэньского университета в Китае представили тест-систему на основе изотермической амплификации и CRISPR-технологии, которая позволяет выявлять вирус панлейкопении в течение часа и при этом демонстрирует чувствительность, сопоставимую с количественной ПЦР.

Целью работы было создание экспресс-метода выявления вируса панлейкопении кошек (feline parvovirus, FPV), который сочетал бы высокую чувствительность и специфичность с минимальным риском лабораторной контаминации — одной из основных проблем быстрых молекулярных тестов.

В рамках исследования авторы разработали и сравнили три варианта диагностического подхода, основанных на комбинации изотермической амплификации ДНК (RAA) и системы CRISPR/Cas12a. Все варианты теста не требовали использования термоциклеров и сложного лабораторного оборудования. Отдельное внимание уделялось так называемой «однопробирочной» схеме, при которой амплификация и детекция происходят в одной закрытой пробирке. По мнению исследователей, такой формат снижает риск загрязнения и повышает воспроизводимость результатов.

Подпишитесь прямо сейчас на наш телеграм-канал, чтобы следить за ветеринарными новостями.

Авторы сообщают, что два варианта теста — с флуоресцентной детекцией в одной пробирке и с разделением этапов амплификации и идентификации — обеспечивали предел обнаружения на уровне 4,3 копии вирусной ДНК на микролитр. Версия теста с визуальным считыванием результата с помощью тест-полоски имела более высокий порог чувствительности — 42,8 копии/мкл, однако, по данным исследователей, оставалась сопоставимой с количественной ПЦР. Все варианты по времени выполнения укладывались в один час.

Специфичность метода оценивали на материале других распространённых вирусных инфекций кошек, включая калицивирус, коронавирус, герпесвирус и вирус иммунодефицита. Перекрёстных реакций выявлено не было.

Метод также протестировали на 36 клинических образцах крови и фекалий, полученных в ветеринарной клинике. Совпадение результатов с ПЦР-диагностикой составило от 97 до 100% в зависимости от варианта теста.

По мнению исследователей, однопробирочная схема CRISPR-диагностики может рассматриваться как перспективный инструмент для экспресс-выявления панлейкопении кошек в условиях ветеринарных клиник и выездной практики. Авторы подчёркивают, что метод не предназначен для замены лабораторной ПЦР, но способен расширить диагностические возможности на ранних этапах заболевания и в ситуациях, когда доступ к полноценной лабораторной диагностике ограничен.

Источник: frontiersin.org