Simeonov Radostin
Department of General and Clinical Pathology, Faculty of Veterinary Medicine, Trakia University, Stara Zagora, Bulgaria, e-mail: rsimeonov@uni-sz.bg
В цитологическом исследовании образцов от 30 кошек с гистологически подтверждённой кожной сквамозно-клеточной карциномой были измерены такие морфометрические показатели, как средняя площадь ядра, средний периметр ядра, средний диаметр ядра, а также минимальный и максимальный диаметр ядра. Затем эти показатели сравнивались в зависимости от наличия или отсутствия метастазов в региональных лимфоузлах. Средние значения этих параметров оказались намного выше у кошек с метастазами в регионарных лимфоузлах, чем у кошек с карциномой без метастазов. Между всеми морфометрическими параметрами и наличием метастазов в регионарных лимфоузлах наблюдалась значительная положительная корреляция. Можно сделать вывод, что компьютерная морфометрия клеточного ядра может быть использована как прогностический метод в диагностике спонтанной кожной сквамозно-клеточной карциномы кошек.
Ключевые слова: ядерная морфометрия, спонтанная кожная сквамозно-клеточная карцинома кошек, метастазы, прогноз.
Вступление
Сквамозно-клеточная карцинома составляет до 15% кожных новообразований у кошек [1–3]. Наиболее частая локализация для этого рака — кожа ноздрей, век и ушей. Примерно в 30% случаев новообразования появляются в нескольких местах. Пик заболеваемости приходится на возраст от 9 до 14 лет [2–4]. Появление новообразований обычно связано с длительным воздействием ультрафиолета, нехваткой меланина в эпидермисе и пониженной волосистостью мест, где появляется опухоль. В её клетках иногда выделяется ДНК вируса папилломы, что свидетельствует о возможном влиянии этого вируса на развитие этой опухоли [4]. Рост сквамозно-клеточной карциномы носит локально инвазивный характер, но опухоль может метастазировать в регионарные лимфатические узлы. Метастазы обычно находят в поднижнечелюстных и заглоточных лимфоузлах, а также в лёгких [5].
Цель данного исследования — выяснить, могут ли численные морфометрические параметры клеточных ядер быть использованы в качестве объективного прогностического критерия при спонтанной сквамозно-клеточной кожной карциноме кошек.
Материалы и методы
Животные
Исследование проводилось на 30 кошках с гистологически подтверждённой спонтанной кожной сквамозно-клеточной карциномой. У 13 из них в ходе диагностики были выявлены метастазы в регионарных лимфоузлах. Клетки новообразования были получены перед операцией путём тонкоигольной аспирационной биопсии, после чего сразу зафиксированы с помощью спрея Merckofix (Merck, Darmstadt, Germany) и окрашены красителем Hemacolor® (Merck, Darmstadt, Germany). После хирургического удаления все опухоли были гистологически классифицированы по правилам Международной гистологической классификации опухолей у домашних животных от ВОЗ [1].
Количественный анализ
Компьютерный цитоморфометрический анализ ядер клеток опухоли проводился с помощью микроскопа и компьютерной программы. Система была настроена на измерения в микрометрах. В каждом случае было изучено не менее 100 ядер. Из измерений исключались все деформированные, повреждённые или накладывающие друг на друга ядра клеток. Измеряемыми параметрами были: средняя площадь ядра (mean nuclear area, MNA; мкм2), средний периметр ядра (mean nuclear perimeter, MNP; мкм), средний диаметр ядра (mean nuclear diameter, D mean; мкм), а также минимальный, максимальный и средний диаметры ядра (D min, D max и D mean соответственно; мкм).
Статистический анализ
Сравнение изученных параметров у кошек с карциномой с метастазами и без было выполнено по U-тесту Манна-Уитни (Statistica 6.0, StatSoft, Tulsa, OK, USA) с заданным уровнем значимости р < 0,05.
Результаты
Данные по всем измеренным параметрам — MNA, MNP, D max, D min, D mean — для каждого случая представлены в таблице 1. Средние значения показателей оказались значительно выше у пациентов с метастазами в регионарных лимфоузлах (таблица 2). Кроме того, для всех морфометрических параметров наблюдалась значительная положительная связь с наличием метастазов в регионарных лимфоузлах (таблица 3).
Таблица 1. Значения морфометрических ядерных параметров в каждом исследованном случае
| Кожная сквамозно-клеточная карцинома кошек |
MNA (P-m2) |
MNP (P-m) |
D max (P-m) |
D min (P-m) |
D mean (P-m) |
| 1 | 70,18 | 29,85 | 10,3 | 8,56 | 9,28 |
| 2 | 73,42 | 30,54 | 10,54 | 8,74 | 9,55 |
| 3 | 79,63 | 32,25 | 11,82 | 8,42 | 9,88 |
| 4 | 77,27 | 33,32 | 12,99 | 6,81 | 9,49 |
| 5 | 78,91 | 32,74 | 12,39 | 7,67 | 9,90 |
| 6 | 75,84 | 30,79 | 10,18 | 8,87 | 9,66 |
| 7 | 77,53 | 33,38 | 13,15 | 6,96 | 9,58 |
| 8 | 80,72 | 35,74 | 14,66 | 6,81 | 9,64 |
| 9 | 71,10 | 33,99 | 14,22 | 5,76 | 9,04 |
| 10 | 83,53 | 32,71 | 11,41 | 8,94 | 10,12 |
| 11 | 98,56 | 35,96 | 12,21 | 10,17 | 11,01 |
| 12 | 95,66 | 35,89 | 12,97 | 8,79 | 10,77 |
| 13 | 85,37 | 33,38 | 12,13 | 8,27 | 10,16 |
| 14 | 85,23 | 34,11 | 12,68 | 7,90 | 10,12 |
| 15 | 94,36 | 36,02 | 12,11 | 8,67 | 10,69 |
| 16 | 88,45 | 33,54 | 11,43 | 9,77 | 10,45 |
| 17 | 98,07 | 36,02 | 12,58 | 9,68 | 10,95 |
| 18* | 96,58 | 37,36 | 8,41 | 14,74 | 11,20 |
| 19* | 94,42 | 35,02 | 9,17 | 12,52 | 10,74 |
| 20* | 86,75 | 33,47 | 9,55 | 11,50 | 10,32 |
| 21* | 110,08 | 32,29 | 10,61 | 12,70 | 11,66 |
| 22* | 101,55 | 36,37 | 9,95 | 12,89 | 11,16 |
| 23* | 103,10 | 36,65 | 10,01 | 12,71 | 11,25 |
| 24* | 111,86 | 38,47 | 10,30 | 13,35 | 11,72 |
| 25* | 102,75 | 38,09 | 8,31 | 14,75 | 11,56 |
| 26* | 106,49 | 37,00 | 10,81 | 12,74 | 11,49 |
| 27* | 122,14 | 39,97 | 10,15 | 14,57 | 12,61 |
| 28* | 102,72 | 37,01 | 8,85 | 13,29 | 11,46 |
| 29* | 118,32 | 38,73 | 10,61 | 13,49 | 12,02 |
| 30* | 115,28 | 39,88 | 9,56 | 14,99 | 12,56 |
MNA — средняя площадь ядра; MNP — средний периметр ядра; D mean — средний диаметр ядра; D min — минимальный диаметр ядра; D max — максимальный диаметр ядра.
*Сквамозно-клеточная карцинома с метастазами в регионарных лимфоузлах.
Таблица 2. Количество случаев (n), среднее (m) и стандартное отклонение (Δ m) измеряемых параметров для пациентов без метастазов (NM) и для пациентов с метастазами (M) со сквамозно-клеточной карциномой кошек
| Групповой параметр | NM (n=17) m ± A m (интервал) | M (n=13) m ± A m (интервал) | Значимость, р |
| MNA (мкм2) | 83,16 ± 9,16 (70,18–98,56) | 105,54 ± 9,95 (86,75–122,14) | р = 0,0001 |
| MNP (мкм) | 33,54 ± 1,97 (29,85–36,02) | 36,94 ± 2,28 (32,29–39,97) | р = 0,0001 |
| D max (мкм) | 12,22 ± 1,23 (10,18–14,66) | 13,40 ± 1,06 (11,50–14,99) | р = 0,0001 |
| D min (мкм) | 8,28 ± 1,17 (5,76–10,17) | 9,71 ± 0,82 (8,31–10,81) | р = 0,0001 |
| D mean (мкм) | 10,01 ± 0,59 (9,04–11,01) | 11,51 ± 0,64 (10,32–12,61) | р = 0,0001 |
Таблица 3. Корреляция коэффициентов (r) между морфометрическими параметрами ядер и наличием метастазов в регионарных лимфоузлах (p < 0,05)
| MNA | MNP (мкм) | D max (мкм) | D min (мкм) | D mean (мкм) | |
| Наличие метастазов |
0,78 | 0,65 | 0,50 | 0,57 | 0,79 |
MNA — средняя площадь ядра; MNP – средний периметр ядра;
D mean — средний диаметр ядра; D min — минимальный диаметр ядра; D max — максимальный диаметр ядра.
Обсуждение
В ветеринарной литературе есть несколько публикаций на тему прогностической значимости компьютерной морфометрии при онкологических заболеваниях. Для перианальной аденокарциномы собак статистически значимая корреляция наблюдается между выживаемостью и такими морфометрическими показателями, как MNA, MNP, D max и D mean, что буквально означает, что собаки с высокими значениями этих показателей имеют худший прогноз [6]. С помощью цитоморфологического анализа ядер можно выявить нерецидивирующую базально-клеточную карциному кошек и собак [7, 8]. В одном исследовании на восьми собаках с себорейной карциномой была выявлена статистически значимая разница значений MNA, MNP,
D min и D mean между собаками с метастазами и собаками без метастазов [9]. При опухолях молочных желёз у кошек значения MNA, MNP, MND и NR (nuclear roundness, округлость ядер) имеют прогностическую значимость, поскольку коррелируют с выживаемостью пациентов [10]. Интересные результаты были опубликованы в одном исследовании прогностической значимости компьютерной морфометрии при кожных мастоцитомах собак [11]. Авторы сравнили две группы пациентов: в одну вошли пациенты с MNA <62,39 мкм (гистологически опухоли классифицированы как низкодифференцированные — 100% выживаемость в течение 2334 дней), во вторую — с MNA >62,39 мкм (высокодифференцированные — 0% выживаемость в течение 752 дней). В другом исследовании тридцати собак с мастоцитомами кожи не было выявлено статистически значимой корреляции между показателями MNA и NR и стадией онкологического процесса. Однако между группами была выявлена достоверная связь между показателями MNA, MNP, клеточно-цитоплазматическим отношением и процентным содержанием многоядерных клеток [12].
В то же время похожих исследований на кошках с кожной сквамозно-клеточной карциномой не публиковалось. В своём предыдущем исследовании цитологических препаратов семнадцати собак со сквамозно-клеточной карциномой мы сравнили значения MNA, MNP, D min,
D max и D mean у собак с метастазами и без метастазов в регионарных лимфоузлах [13]. Мы выяснили, что эти показания имеют статистически значимые различия, и предположили, что компьютерная морфометрия может быть использована для оценки метастатического потенциала таких опухолей. В другом исследовании мы также нашли статистически значимые различия в одних и тех же морфометрических параметрах между сквамозно-клеточными карциномами собак с разными стадиями опухолевого роста [14].
В заключение, мы считаем, что компьютерная морфометрия ядер клеток может использоваться в качестве прогностического метода в диагностике спонтанных кожных сквамозно-клеточных карцином кошек. Методика представляется относительно простой в исполнении, и будущее покажет, выйдет ли этот способ за рамки сферы исследований и получит ли практическое применение.
Литература
- Goldschmidt M, Dunstan R, Stannard A, von Tscharner C, Walder E, Yager, J: Histologic Classification of Tumors of the Skin of Domestic Animals, World Health Organization International Classification of Tumors of Domestic Animals, Second Series, Vol III, Washington, D.C., Armed Forces Institute of Pathology, American Registry of Pathology, 1998.
- Schwegler K., Walter J, Rudolph, R: Epithelial neoplasms of the skin, the cutaneous mucosa ant the transitional epithelium in dogs: an immunolocalization study for papilomavirus antigen. Zentral Vetertinarmed A 1997, 44:115–123, 1997.
- Goldschmidt M, Shofer F: Squamous cell carcinoma. In: Skin Tumours of Dogs and Cat. Oxford, Reed Educational and Professional Publishing Ltd, 1998.
- Goldschmidt, M, Goldschmidt K: In: Tumors in Domestic Animals, 5 th Edition, John Wiley & Sons 2017, 88–142.
- Theon A, Madewell B, Shearn, V: Prognostic factors assosiated with radiotherapy of squamous cell carcinoma of the nasal plane in cats. J Am Vet Med Assoc 1995, 196:991996.
- Simeonov R, Simeonova G: Computer-assisted nuclear morphometry in the cytological evaluation of canine perianal adenocarcinomas. J Comp Pathol 2008, 139:226–230.
- Simeonov R, Simeonova G: Nucleomorphometric analysis of feline basal cell carcinomas. Res Vet Sci 2008, 84:440–443.
- Simeonov R, Simeonova G: Comparative morphometric analysis of recurrent and nonrecurrent canine basal cell carcinomas: a preliminary report. Vet Clin Pathol 2010, 39:96–98.
- Simeonov R, Simeonova G: Prognostic value of nuclear morphometry in spontaneous canine sebaceous carcinomas: a preliminary report. Comp Clin Pathol 2010, 19:405–408.
- Simeonov R, Simeonova G: Nuclear cytomorphometry in feline mammary gland epithelial tumours. Vet J 2009, 179:296–300.
- Strefezzi RF, Xavier JG, Kleeb SR, Catao-Dias JL: Nuclear morphometry in cytopathology: a prognostic indicator for canine cutaneous mast cell tumors. J Vet Diagn Invest 2009, 21:821–825.
- Neto RT, Pinczowski P, Rahal SC, Kitchell BE, Amorim RL: Cytoplasmic and nuclear morphometric parameters in cytologic preparations of canine cutaneous mast cell tumors. Braz J Vet Pathol 2010, 3:93–99.
- Simeonov R: Nuclear morphometry in relation to metastases in canine cutaneous squamous cell carcinomas: TJS 2010, 8 (1):74–78.
- Simeonov R: Nuclear morphometry in relation to tumor grade in canine spontaneous cutaneous squamous cell carcinomas. Turk J Vet Anim Sci 2009, 33:439–442.
Источник: Acta Veterinaria-Beograd 2018, 68 (3), 251–256. Acta Veterinaria is an Open Access Journal. All articles can be downloaded free of charge and used in accordance with the Creative Commons Attribution 4.0 International (CC BY 4.0).
СВМ № 3/2019