Обзор различных диагностических методик для выявления паразитарных инфекций ЖКТ у собак

 

Breno Barros de Santana1, Tallys Leandro Barbosa da Silva1, Rafael Antonio Nascimento Ramos2,3, Leucio Câmara Alves2, Gilcia Aparecida de Carvalho1
1
Unidade Acadmica de Garanhuns, Universidade Federal Rural de Pernambuco, Garanhuns, Brazil.

2 Departamento de Medicina Veterinária, Universidade Federal Rural de Pernambuco, Recife, Brazil.
3 Dipartimento di Medicina Veterinaria, Universit degli Studi di Bari, Bari, Italy.

 

Резюме

Кишечные нематоды — одни из самых распространённых кишечных паразитов у собак, а Toxocara spp. и Ancylostoma spp. представляют угрозу также и для общественного здравоохранения в связи со своим зоонозным потенциалом. В этой статье представлен обзор трёх диагностических техник, позволяющих выявить яйца/ооцисты желудочно-кишечных паразитов у собак. Для исследования были собраны образцы кала из окружающей среды (публичные места, парки, улицы и дворовые территории) в городе Гараньюнс (штат Пернамбуку, Бразилия). Образцы анализировались с помощью простой техники флотации Уиллиса–Моллея, спонтанной седиментации (Hoffman, Pons and Janer) и модифицированной техники флотации в центрифуге. Среди подвергшихся анализу образцов, 56,49% (161/285) оказались положительны на яйца и/или ооцисты кишечных паразитов. В частности, 44,21% (126/285) были выявлены с помощью техники Уиллиса, 45,14% (121/268) — методом флотации в центрифуге и 31,57% (90/285) методом Хоффмана. Коэффициент Каппа Коэна показал хорошую согласованность методов флотации в центрифуге и Уиллиса (k = 0,625), удовлетворительную согласованность между методами Хоффмана и Уиллиса
(k = 0,480) и методами Хоффмана и флотации в центрифуге (k = 0,433). В целом метод флотации в центрифуге показал высокую чувствительность к Ancylostoma spp. и Toxocara spp. (наиболее часто встречавшиеся паразиты в этом исследовании), и он может применяться в комбинации с техникой Уиллиса, чтобы обезопасить конечной диагноз от погрешностей в ходе рутинной лабораторной диагностики.

 

Вступление

Паразитарные заболевания являются одними из самых опасных зоонозных инфекций по всему миру и считаются серьёзной угрозой для социоэкономического равновесия, в особенности в развивающихся странах [1]. К примеру, паразиты собак, такие как Toxocara spp. и Ancylostoma spp., создающие в организме фон для висцерального и кожного вида гельминтоза larva migrans, имеют огромное санитарное значение [2, 3].

Несмотря на наличие широкого спектра терапевтических и профилактических мер, доступных в наше время, яйца и ооцисты паразитов довольно часто выявляются в кале собак, а их элиминация в окружающую среду является для паразитов путём передачи к новому хозяину, в т. ч. людям [4, 5]. Большинство этих кишечных паразитов (т. е. Toxocara spp., Ancylostoma spp. и Cystoisospora canis) распространены в основном в городских и пригородных областях, в тропических зонах с неадекватными санитарными условиями [6, 7]. В настоящее время, в связи с ростом количества семей, в которых есть собаки, число людей, подверженных риску паразитарной зоонозной инфекции также увеличивается [2].
В то же время человеческие инфекции представляют риск не столько в домашней обстановке, сколько в общественных местах (парки, улицы и т. д) [8–12].

Методы диагностики паразитарных инфекций применяются для выявления кишечных паразитов путём выявления различных паразитарных форм (яйца, личинки, ооцисты или трофозоиды), которые выводятся с калом. Несмотря на прогресс лабораторной техники и преимущества молекулярного тестирования, паразитологические методы всё ещё играют важную роль в здравоохранении, в основном благодаря своей простоте и низкой стоимости [13–15]. Однако, поскольку диагностика основывается на выявлении яиц или ооцист, подтверждение в некоторых случаях может представлять сложности [6]. Кроме того, выбор наиболее удобного для рутинного использования в условиях лаборатории может стать препятствием для эффективной диагностики. В связи с этим, целью данного исследования стала оценка трёх разных техник (техника флотации Уиллиса–Моллея, спонтанной седиментации Хоффмана, Понса и Дженер, модифицированная техника флотации в центрифуге) выявления яиц/ооцист кишечных паразитов собак.

 

Материалы и методы

Сбор образцов

С августа 2011 по июль 2012 года образцы собачьих экскрементов (n = 285) собирались в общественных местах (улицы, парки и дворовые территории) в городе Гараньюнс, штат Пернамбуку, Бразилия. Собранные образцы помещались в пластиковые контейнеры, подписывались и хранились в изотермальных боксах при температуре 4°C вплоть до обработки в лаборатории.

 

Лабораторные процедуры

Все образцы анализировались с помощью трёх разных техник для выявления яиц и ооцист: 1) техники флотации Уиллиса–Моллея [16]; 2) спонтанной седиментации Хоффмана, Понса и Дженер [17]; 3) модифицированная техника флотации в центрифуге [18]. Далее в тексте методы будут обозначаться как техники Уиллиса, Хоффмана и флотации в центрифуге.

После приготовления препаратов для каждой техники, все образцы помещались на стёкла с добавлением 2% раствора Люголя и направлялись на исследование под микроскопом под различными увеличениями (10× и 40×). Яйца и ооцисты выявлялись описанным ранее методом [19, 20].

 

Таблица 1. Инвазии и коинвазии, выявленные с помощью каждой техники диагностики кишечных инвазий собак, среди образцов экскрементов собак, собранных в районе города Гараньюнс

Техника Паразиты Положительных результатов (%/n)
Техника
Уиллиса
Ancylostoma spp.

Toxocara spp.

Dipyllidium spp.

Ancylostoma spp. + Toxocara spp.

Dipyllidium spp. + Toxocara spp.

Ancylostoma spp. + Dipyllidium spp.

Ancylostoma spp. + Isospora spp.

Toxocara spp. + Isospora spp. + Dipyllidium spp. + Ancylostoma spp. + Trichuris spp.

Ancylostoma spp.+ Thichuris spp.
+ Giardia spp. + Isospora spp.

76,20% (96/126)

4,80% (06/126)

1,70% (02/126)

8,73% (11/126)

2,55% (03/126)

2,55% (03/126)

1,70% (02/126)

0,85% (1/126)

 

 

0,85% (1/126)

Модифицированная техника флотации в центрифуге Ancylostoma spp.

Toxocara spp.

Dipyllidium spp.

Ancylostoma spp. + Toxocara spp.

Ancylostoma spp. + Dipyllidium spp.

Ancylostoma spp. + Strongyloides spp.

Toxocara spp. + Isospora spp.

Ancylostoma spp + Isospora spp.

80,16% (97/121)

5,77% (07/121)

0,83% (01/121)

9,09% (11/121)

0,83% (01/121)

 

 

0,83% (01/121)

0,83% (01/121)

Техника спонтанной седиментации Хоффмана Ancylostoma spp.

Toxocara spp.

Dipyllidium spp.

Ancylostoma spp. + Toxocara spp.

Ancylostoma spp. + Dipyllidium spp.

Ancylostoma spp. + Trichuris spp

Ancylostoma spp. + Toxocara spp. + Trichuris spp.

75,56% (68/90)

8,89% (08/90)

2,22% (02/90)

8,89% (08/90)

2,22% (02/90)

1,11% (01/90)

1,11% (01/90)

 

Анализ данных

Анализ данных на основании коэффициента Каппа Коэна был проведён для сравнения результатов тестов. Значения Каппа были интерпретированы в соответствии с принятой схемой [21]. При оценке чувствительности, специфичности, положительной прогностической значимости (positive predictive value; +PV), отрицательной прогностической значимости (negative predictive value; –PV) и точности техника Уиллиса принималась в качестве золотого стандарта [22]. Для расчёта параметров использовалось программное обеспечение Bioestat 5.0 и Epi-Info.

 

Результаты

Из 285 образцов яйца/ооцисты кишечных паразитов были выявлены в 56,49% (161/285) случаев: 44,21% (126/285) — с помощью техники Уиллиса, 45,14% (121/268) — методом флотации в центрифуге и 31,57% (90/285) — методом Хоффмана. Все результаты о найденных с помощью каждой техники инвазиях и коинвазиях приведены в таблице 1.

Стоит отметить, что Ancylostoma spp. и Toxocara spp. выявлялись чаще всего, независимо от используемого метода. Средние количества найденных яиц/ооцистов с помощью всех техник указаны в таблице 2.

 

Таблица 2. Абсолютная и относительная частота, среднее количество яиц и стандартное отклонение оценки кишечных паразитов, выявленных в образцах экскрементов собак, собранных в районе города Гараньюнс

Уиллиса Флотации в центрифуге Хоффмана
AF (n) Mn Mx x ± SD RF (%) AF (n) Mn Mx x ± SD RF (%) AF (n) Mn Mx x ± SD RF (%)
Ancylostoma spp. 1595 0 113 5,96 ± 0,9 88,7 2171 0 200 8,101 ± 1,4 79,1 392 0 45 1,38 ± 0,2 63,7
Toxocara spp. 196 0 55 0,7 ± 0,3 10,9 541 0 336 2,02 ± 1,3 19,7 220 0 72 0,77 ± 0,3 35,7
Trichuris spp. 06 0 06 0,02 ± 0,01 0,33 06 0 06 0,02 ± 0,02 0,22 03 0 02 0,01 ± 0,007 0,4
Strongyloides spp. 24 0 17 0,08 ± 0,06 0,88
Общее (n) 1791 100 2742 100 617 100

 

С помощью анализа Каппа Коэна были получены следующие результаты: Уиллис vs техника флотации в центрифуге (k = 0,625; P <0,001) — хорошая согласованность; Уиллис vs Хоффман (k = 0,480; P < 0,001) — удовлетворительная согласованность; флотации в центрифуге vs Хоффман (k = 0,433; P < 0,001) — удовлетворительная согласованность. Чувствительность, специфичность, +PV, –PV и точность описаны в таблице 3.

 

Обсуждение

В этом исследовании были оценены три разные диагностические методики (Уиллиса, Хоффмана и флотации в центрифуге). Результаты демонстрируют разницу между методами, в особенности это касается процента положительных результатов — 44,21% (126/285), 45,14% (121/268) и 31,57% (90/285), для Уиллиса, Хоффмана и техники флотации в центрифуге соответственно. Хотя разница и незначительна, она даёт представления о специфических свойствах каждого метода.

 

Таблица 3. Оценка техник флотации в центрифуге и спонтанной седиментации Хоффмана в сравнении с техникой Уиллиса (золотой стандарт) в диагностике кишечных паразитов, в образцах экскрементов собак, собранных в районе города Гараньюнс

Модифицированная техника флотации в центрифуге Техника спонтанной седиментации Хоффмана
Ancylostoma spp. Toxocara spp. Trichuris spp. Ancylostoma spp. Toxocara spp. Trichuris spp.
Чувствительность 79,00% 80,00% 000,00% 54,00% 67,00% 000,00%
Специфичность 85,00% 98,00% 100,00% 89,00% 100,00% 100,00%
PV (+) 80,00% 73,00% 000,00% 76,00% 100,00% 000,00%
PV (—) 85,00% 98,00% 100,00% 75,00% 97,00% 100,00%
Точность 83,00% 96,00% 99,00% 75,00% 97,00% 99,00%

 

Среди выявляемых паразитов чаще всего встречалась Ancylostoma spp., а также Toxocara spp. и Trichuris spp. Эти результаты согласуются с результатами предыдущего исследования, проводившегося в штате Санта Катарина, где Dipylidium caninum, Toxocara canis и Trichuris vulpis были самыми выявляемыми видами [23].

Самая высокая относительная частота во всех методиках была у Ancylostoma spp. (63,74% к 88,76%). С другой стороны, Toxocara spp. была самым выявляемым паразитом при использовании техники Хоффмана (35,77%), по сравнению с техниками Уиллиса и флотации в центрифуге, при которых средняя частота выявления этого паразита составила менее 20%. В отличие от других паразитов, относительная частота выявления яиц Trichuris spp. и Strongyloides spp. составила менее 1%. Последнее было установлено только благодаря модифицированной методике флотации в центрифуге. Любопытно, что большие количества яиц, выявляемые в некоторых случаях (к примеру, в одном случае с помощью флотации в центрифуге было найдено 336 яиц Toxocara spp. и 200 Ancylostoma spp.), выявили острую паразитарную инфекцию и лишний раз подчеркнули важность правильного выбора метода диагностики гельминтозов.

Приняв технику Уиллиса за золотой стандарт, чувствительность и специфичность в 79 и 85% соответственно были достигнуты в диагностике Ancylostoma spp., что говорит о хорошем результате, согласно коэффициенту Каппа Коэна (0,625). В то же время метод Хоффмана показал схожее значение специфичности (89%), но уступил в чувствительности (54%).

Флотация в центрифуге выявляет концентрацию яиц путём нескольких последовательных смывов, таким образом позволяя идентифицировать их. При этом методе наблюдалась высокая специфичность (98%) и чувствительность (80%) в выявлении Toxocara spp. С другой стороны, метод Хоффмана продемонстрировал чувствительность и специфичность в 67 и 100% соответственно. Для обоих этих тестов коэффициент Каппа Коэна составил 0,48, что говорит об удовлетворительной точности результатов. Таким образом, это указывает на необходимость проводить эти тесты параллельно с целью повысить эффективность выявления токсокарид.

В целом техники Уиллиса и флотации в центрифуге показали хорошую воспроизводимость; к тому же обе техники выявили большое количество яиц Ancylostoma spp. и Toxocara spp. Разница в чувствительности и специфичности проистекает из их индивидуальных особенностей, и она может увеличиваться в зависимости от конкретного паразита [24]. В этом контексте рекомендуется проводить анализ кала с помощью более чем одной техники. Использование одного метода может не выявить реальную ситуацию паразитарной инфекции, особенно учитывая то, что у животных зачастую присутствуют смешанные инвазии.

Заключение

Для достижения надёжного диагностического результата метод флотации в центрифуге, который показал высокую чувствительность к Ancylostoma spp. и Toxocara spp. (самым распространённым кишечным инвазиям), может быть использован в совокупности с техникой Уиллиса в протоколе рутинной лабораторной диагностики.

 

 

Источник: Open Journal of Veterinary Medicine, 2015, 5, 19–24. This work is licensed under the Creative Commons Attribution International License (CC BY). http://creativecommons.org/licenses/by/4.0/

Подпишитесь на наш телеграм-канал и получайте важные отраслевые новости в удобном для вас формате.
Оценить материал
Нравится
Нравится Поздравляю Сочувствую Возмутительно Смешно Задумался Нет слов

Добавить комментарий

Войти с помощью: 

Подписка на новости

После отправки заполненной формы Вам на почту придёт письмо со ссылкой для подтверждения рассылки. Если Вы не видите письма, проверьте папку «Спам». Если не подтвердить рассылку, мы не сможем отправлять её Вам.






Нажимая на кнопку «Подписаться», я даю согласие на обработку персональных данных
Я ознакомлен с политикой конфиденциальности

Close