К. Гирардет, А. Кодью, Ж.-Луи Мари, В. Рус, Б. Даус
Лептоспироз у собак — это основной зооноз, который всегда является предметом обсуждения среди специалистов. его эпизоотия за счёт размножения редко встречающихся сероваров эволюционировала.
Лептоспироз — это инфекционное заболевание, которое затрагивает многие виды животных. Оно вызвано множеством сероваров, более 200, классифицированных в 23 серогруппы, происходящих от вида Leptospira interrogans (L. i) sl. У собак этот злостный возбудитель вызывает острое течение с наиболее выраженной формой иктерогеморрагической желтухи, также медленно переходящей в другие формы, с тяжёлой или умеренной клинической картиной или достаточно атипичной, вызывающей большие сложности в постановке диагноза (G. Andre-Fontaine, 2008; G. Andre-Fontaine, 2006; C.E. Greene, M.A. Miller, C.A. Brown, 1988).
Лептоспироз собак всегда актуален, но его инцидентность недооценивается. Его эпизоотия эволюционирует за счёт наиболее частого обнаружения других патогенных сероваров в отличие от Icterohemorrhagiae и Canicola, ответственных за данное заболевание. В этой статье рассматривается атипичный случай лептоспироза, вызванного необычным сероваром.
История жизни и анамнез
Собака, служебная армейская, бельгийская овчарка малинуа, самец (собака № 1) в возрасте 5 лет, представлена на консультацию по причине рвоты съеденным кормовым продуктом, а также желчью, появившейся два дня тому назад, но без потери аппетита. Каких-либо алиментарных изменений в кормлении выявлено не было, и какого-либо лечения также не назначали. Собака родилась во Франции, никогда её не вывозили за границу или в какую-нибудь страну Средиземноморья. Животное живёт в будке, на улице, планово вакцинировано инактивированной вакциной (Canigen L Virbac®), которая защищает по отношению к L. I. Canicola и L. Icterohaemorrhagiae. Последняя ревакцинация проведена 7 месяцев назад. Лечебно-профилактические обработки от эндо- и эктопаразитов были проведены. Какого-либо осложнения при назначении лекарственных препаратов не отмечалось.
Клиническое обследование
Собака незначительно угнетена, без проявления признаков температуры (37,8°С). Цвет слизистых и состояние гидратации соответствуют норме, лимфатические узлы не гипертрофированы. Во время аускультации кардиореспираторного аппарата каких-либо отклонений выявлено не было. При пальпировании брюшной полости отмечается её безболезненность и отсутствие какой-либо массы или накопления жидкости или газа. Мочеиспускание соответствует норме, и диурез сохранен. Во время самого начала исследования диареи или полиуро-полидипсии не отмечали.
Диагностические предположения
На данном этапе исследования предполагалось несколько диагнозов с причинами, вызывающими расстройство пищеварительного тракта: гастрит, инфекционный гастроэнтерит, инородное тело, обструкция пилоруса или кишечника, проблема вне пищеварительного тракта, вызывающая системное заболевание (панкреатит, гепатит, недостаточность почек ишемической природы у собаки, интоксикация или инфекция).
Дополнительные методы исследования
Дополнительные лабораторные исследования были проведены в день поступления пациента для осуществления поиска факторов вне системы пищеварения, выявления причины рвоты, где также оценивали дисравновесие водно-солевого баланса.
Анализ мочи
Анализ мочи был ориентирован на определение плотности методом рефрактометрии, где также использовали полоски и проводили цитобактериологическое исследование. Результаты исследования показали, что в моче персистируют сахар и кровь. Плотность мочи незначительно снижена (1,010). В осадке отмечено наличие кристаллов аммонио-магнезиевых фосфатов, и питательная среда для выявления бактериального роста оказалась стерильной.
Анализ крови
В анализ крови было включено клиническое и биохимическое исследования с акцентированием на получение ионограммы. Общее количество гранулоцитов соответствовало верхней границе нормы и выше обычной оценки, получаемой для данной собаки, которую регулярно обследовали (в пределах 5 и 6 × 109/л). Было отмечено увеличение креатинина и мочевины (натриемия, калиемия и фосфатемия соответствовали норме). На основании выше сказанного диагноз был ориентирован на острую почечную недостаточность у собаки (таблица 1).
Таблица 1. Результаты исследования крови у собаки № 1
|
Параметры (1) |
Результаты |
Норма |
|
Биохимия крови |
||
| Мочевина |
2,43 г/л |
0,15–0,56 г/л |
| Креатинин |
48,8 мг/л |
5–18 мг/л |
| АЛТ |
130 МЕ/л |
10–100 МЕ/л |
| ЩФ |
151 МЕ/л |
23–212 МЕ/л |
| Глюкоза |
1,21 г/л |
0,74 –1,43 г/л |
| Общий белок |
70 г/л |
51–82 г/л |
| Кальций |
2,64 ммоль/л |
2,35–2,93 ммоль/л |
| Калий |
4,4 ммоль/л |
4,1–5,4 ммоль/л |
| Натрий |
143 ммоль/л |
143–168 ммоль/л |
| Фосфор |
0,9 ммоль/л |
0,9–2 ммоль/л |
|
Клинический анализ крови |
||
| Гематокрит |
37,5% |
37–55% |
| Гемоглобин |
13,7 г/дл |
12–18 г/дл |
| Лейкоциты |
16,6 × 109/л |
6–16,9 × 109/л |
| Гранулоциты |
14 × 10/л |
3,3–12 × 109/л |
| Нейтрофилы |
12,3 × 10/л |
2,8–10,5 × 109/л |
| Лимфоциты/моноциты |
1,9 × 109/л |
1,1–6,3 × 109/л |
| Тромбоциты |
156 × 109/л |
175–500 × 109/л |
(1) Измерение осуществляли методом ОВС-vetAutoreader® (Idexx). АЛТ: аланинаминотрансфераза; ЩФ: щелочная фосфатаза. Цифры, обозначенные полужирным шрифтом, указывают на превышение нормы по сравнению с референс-контролем.
Визуальная диагностика
Эхографическое исследование мочевыделительной системы указывает на норму на уровне мочевого пузыря и простаты. Картина почек также свидетельствует о незначительной эхогенности коркового слоя почек (правая почка), но граница коркового и мозгового слоёв всегда присутствует. Размер и контур почек не изменён (фото 1, 2).
Эхография пищеварительного тракта, включая поджелудочную железу и печень, соответствовали норме.
 |
Фото 1. Эхографическое исследование левой почки: размер и контуры не изменены |
 |
Фото 2. Эхографическое исследование правой почки: незначительная гипоэхогенность кортикального слоя почки |
Серологическое исследование
Наконец, чтобы поставить этиотропный диагноз острой почечной недостаточности у собаки, проводилось серологическое исследование на лептоспироз у собаки, эрлихиоз, дирофиляриоз и лейшманиоз.
Забор материала осуществляли через 3 дня после консультации, т. е. на 5-й день с начала проявления клинических признаков заболевания.
Что касается трёх последних серологических исследований, то результат быстрого тестирования Snap® (Idexx лаборатория, США) оказался отрицательным.
Для серологического исследования на лептоспироз использовали тест микроагглютинации (ТМА) в сочетании с референс-контролем. Этот тест основан на выявлении агглютинации живых лептоспир для каждого серовара тестируемой Leptospira interrogans за счёт антител, персистирующих в крови подозреваемой на заболевание собаки (фото 3 и 4). Использовались возрастающие разведения сыворотки (G. Andre-Fontaine, 2008; C.E. Greene, M.A. Miller, C.A. Brown, 1988). Тестирование осуществляли на 15 сероваров, исходящих из 14 разных серологических групп. Результаты исследования соответствовали наличию лептоспироза у собаки, вызванного австралийским или/и гриппотифозным сероварами: позитивная реакция 1/6400 и 1 / 3200 соответственно (таблица 2); позитивный порог согласно лабораторному исследованию института Пастера в Париже равен 1 /100).
Постановка диагноза
В связи с отсутствием дегидратации, а также потери крови или обструкции мочевыводящих путей, в сочетании с результатами дополнительных исследований, был поставлен диагноз на острую паренхиматозную (истинную, или ренальную) почечную недостаточность у собаки. Этиотропным фактором инфекционного заболевания лептоспирозом является серовар, не сиблированный вакцинацией против сероваров Australis или Grippotyphosa, входящих в группу Leptospira interrogansе. Высокий титр антител по отношению к этим двум разным сероварам, выявленный методом разведения, не позволил нам прийти с уверенностью к заключению о том, что какой-то из этих патогенов ответственен за данное заболевание.
Прогноз
Некоторые осложнения на уровне обмена веществ, связанные с острой почечной недостаточностью у собаки, не проявились, и, несмотря на то, что прогноз сдержанный, к сомнительному отнести его нельзя по следующим причинам:
- отсутствие нормохромной нормоцитарной и слаборегенеративной анемии;
- отсутствие потери белка (гипоальбуминемии);
- отсутствие гиперфосфатемии, ассоциирующейся с начальным снижением гломерулярной фильтрации;
- отсутствие метаболического ацидоза.
Таблица 2. Список сероваров Leptospira interrogans тестируемые в институте Пастера в Париже в сыворотке собаки № 1
| Серовары лептроспир (ТМА) | Полученные результаты |
| Leptospira serovar Australis | 1/6400 |
| Leptospira serovar Autumnalis | 1/800 |
| Leptospira serovar Bataviae | Отрицательный |
| Leptospira serovar Canicola | 1/400 |
| Leptospira serovar Castellonis | Отрицательный |
| Leptospira serovar Cynopteri | 1/400 |
| Leptospira serovar Grippotyphosa | 1/3200 |
| Leptospira serovar Hebdomadis | Отрицательный |
| Leptospira serovar Icterohaemorrhagiae | 1/600 |
| Leptospira serovar Panama | Отрицательный |
| Leptospira serovar Pomona | 1/100 |
| Leptospira serovar Pyrogenes | |
| Leptospira serovar Sejroe | |
| Leptospira serovar Hardjo | Отрицательный |
| Leptospira serovar Tarassovi |
ТМА — тест на микроагглютинацию. Порог чувствительности 1/100. Последняя вакцинация против лептоспироза у собаки была выполнены 7 месяцев назад
 |
| Фото 3. Пример позитивной реакции ТМА (тест на микроагглюцинацию) |
 |
| Фото 4. Пример негативного ТМА: наличие лептоспир во время аттестации, свидетельствующих об отсутствии агглютинирующих антител к тестируемой сыворотке (белые пятна, соответствующие визуализации аутоагглюцинации лептоспир) |
Лечение
Собаку с лептоспирозом госпитализировали в этот же день. Была назначена диета в течение 24 часов совместно с инфузией (лактат Рингера из расчёта 5 мл/кг/час) для поддержания гидратации и элиминации азотистых шлаков.
Были также назначены антибиотикотерапия (онрофлоксацин, 5 мг/кг/ сутки п/к, Baytril®) и противорвотное средство центрального и периферического действия (метоклопрамид, 0,7 мг/кг 2 раза в день в/в, Primperid®). Диурез протекал спонтанно без назначения диуретиков.
Развитие заболевания
Через 24 часа после терапевтической реанимации и антибиотикотерапии биохимические показатели соответствовали норме. Рвоту контролировали (аппетит сохранен), и жидкую питательную смесь, обогащенную белками, жирами и углеводами (Fortol®) вводили энтерально в течение суток до принятия пациентом самостоятельно специального корма, изготовленного на основе крокет.
Инфузионную терапию проводили на протяжении 4 дней в сочетании с поддерживающей антибиотикотерапией в течение 8 дней. После получения результатов серологического исследования, свидетельствующих о лептоспирозе у собаки, назначение цефалоспоринов было прекращено и заменено на доксициклин (Doxyval®, из расчёта 10 мг/кг/сутки перорально) с целью упреждения хронического носительства возбудителя в почках.
Своевременное адаптированное и этиотропное лечение является условием прогноза на выживаемость.
Через 10 дней после госпитализации клиническое состояние пациента и результаты анализа мочи и крови оказались удовлетворительными, и собаку отдали на руки владельцу (таблица 3 и фото 5).
Таблица 3. Оценка анализов крови у собаки № 1 через 10 дней после госпитализации и курса лечения
| Параметры | Результаты | Норма |
| Биохимия крови | ||
| Мочевина | 0,323 г/л | 0,15-0,56 г/л |
| Креатинин | 19,2 мг/л | 5-18 мг/л |
| АЛТ | 109 МЕ/л | 10-100 МЕ/л |
| ЩФ | 368 МЕ/л | 23-212 МЕ/л |
| Глюкоза | 1,04 г/л | 0,74 -1,43 г/л |
| Общий белок | 65 г/л | 52-82 г/л |
| Клинический анализ крови | ||
| Гематокрит | 36% | 37-55% |
| Гемоглобин | 12 г/дл | 12-18 г/дл |
| Лейкоциты | 9,8 × 109/л | 6-16,9 × 109/л |
| Гранулоциты | 7,5 × 109/л | 3,3-12 × 109/л |
| Нейтрофилы | 6,4 × 109/л | 2,8-10,5 × 109/л |
| Лимфоциты/моноциты | 2,3 × 109/л | 1,1-6,3 × 109/л |
| Тромбоциты | 334 × 109/л | 175-500 × 109/л |
 |
| Фото 5. Собака, возвращённая на военную базу через 10 дней после госпитализации |
Обсуждение
Эпизоотологическое исследование
Ознакомление и сфера деятельности
В связи с вовлечением в инфекционное заболевание сероваров других лептоспир, которые обычно встречаются, было проведено эпизоотологическое исследование с целью идентификации источника контаминации в окружающей среде и носительство бактерий — возбудителей инфекционного заболевания собак из того же питомника. Это исследование было проведено совместно с лабораторией лептоспироза ENV г. Лиона. Питомник, где содержится собака, располагается на базе воздушных сил Крэил. Питомник регулярно подвергают дератизации, поэтому грызунов в этом месте не наблюдали. Одним лишь диким животным, которое могло находиться вблизи этого питомника и войти в контакт с собаками, считали одичавшего кролика, сбежавшего в своё время из ближайшего крольчатника.
Все собаки, содержащиеся в питомнике (29 особей), были подвержены забору крови с целью выявления лептоспироза (через несколько месяцев после клинического случая с этой собакой, переболевшей лептоспирозом). Годичная вакцинация находящихся на службе собак была выполнена путём применения поливалентной вакцины DHPPiLR, включавшей в себя инактивированную вакцину против сероваров Icterohaemorrhagiae и Canicola (таблица 4).
Таблица 4. Положительные результаты, полученные от 3 собак на другие серовары, помимо Canicola и Icterohaemorrhagiae
Порог чувствительности 1/40 (результаты лабораторного исследования на лептоспироз ENV г. Лиона)
Метод
Обнаружение персистенции лептоспироза у собак осуществляют с помощью теста микроагглюцинации (ТМА).
ТМА — это контрольный диагностический метод, основанный на иммунном ответе по отношению к инфицированию лептоспирозом (G. Andre-Fontaine, J. Hernandez, 2008; C.E. Greene, M.A. Miller, C.A. Brown, 1988). Этот метод исследования, с помощью которого выявляют иммуноглобулины G, считается достаточно чувствительным и относительно рано применяемым на практике, позитивная реакция при проведении которого выявляется приблизительно через 8 дней с момента проявления клинического заболевания. Кроме того, эти антитела могут персистировать в организме на протяжении месяцев. Один очень высокий титр в корреляции с клиникой заболевания и эпизоотологической ситуацией или с проведением анализа кинетики антител (двукратное титрование с интервалом три недели) может информировать о недавнем характере инфицирования. Другой метод диагностики, который может быть использован для анализа крови на персистенцию в организме возбудителя, — это генетическая полимеразная цепная реакция (ПЦР) (на 7-й день с момента инфицирования) или мочи у подозреваемого на заболевание животного, позволяющая выявить ДНК лептоспир. Этот ранний, специфический и быстрый метод диагностики (в образце крови) также имеет ряд неудобств: свидетельствует лишь о персистенции возбудителя, относящегося к Leptospira interrogans, не позволяя идентифицировать серовар, причастный к данному заболеванию, и в связи с транзиторной лептоспиремией и лептоспирурией, ПЦР иногда может быть ошибочно негативной. Следовательно, негативная ПЦР не позволяет прийти к заключению об отсутствии носительства собаками лептоспироза.
Результаты
Результаты теста на микроагглюцинацию считают позитивными при наличии титра 1 / 40. Завышенный титр на агглютинирующие антитела, формируемые организмом по отношению к другим сероварам, не относящимся к Canicola и Icterohaemorrhagiae, дифференцируется ответом на вакцинацию, что неоспоримо свидетельствует об инфекционной природе заболевания (G. Andre-Fontaine, J. Hernandez, 2008, G. Andre-Fontaine, 2006).
Интерпретация иммуноглобулинов, направленных по отношению к сероварам вакцинных лептоспир, значительно сложнее и должна быть выполнена в корреляционной взаимосвязи между временем забора крови и последней вакцинацией. Таким образом, общие уровни агглютинирующих антител по отношению к сероagiae и Canicola, превышающим титр 1 / 320, могут сигнализировать об инфекционной природе заболевания, если вакцинация была проведена более чем за три месяца до заболевания (G. Andre- Fontaine, J. Hernandez, 2008, G. Andre-Fontaine, 2006; A. Kodjio, 2008). Персистенция этих агглютинирующих поствакцинальных антител длится относительно короткий период времени (G. Andre-Fontaine, C. Branger, A.W. Gray et coll., 2003; H.L.B.M. Klaasen, M.J.C.H. Molkenboer, M.P. Vrijenhoek et coll., 2003; J.M. Minke, R. Bey, J.P. Tronel et coll., 2009). Более высокие титры были выявлены Стоком и его сотрудниками с целью идентифицировать позитивный порог инфицирования для сероваров Icterohaemorrhagiae и Canicola, но они не применялись во Франции, потому как вакцинация против лептоспироза, которую использовали в исследовании, была четырёхвалентной (J.E. Stokes, J.B. Kaneene, W.D. Schall et coll., 2007). Слабые титры при этом были ниже 1/320 и могли быть сформированы другими сероварами, которые содержались в настоящей вакцине в связи с перекрёстной реакцией между антигенами разных сероваров (G. Andre-Fontaine, J. Hernandez, 2008, G. Andre-Fontaine, 2006). Затем интерпретация результатов одного титра должна строго коррелировать с клиническим проявлением и данными эпизоотологического состояния в регионе. Наиболее строгий диагностический подход через реализацию кинетики антител, подразумевающий под собою двойное титрование с интервалом в три недели, необходим, чтобы выявить, наконец, сероконверсию или увеличение общего количества антител, непосредственно связанных с недавним инфицированием лептоспирами.
Применение атипичных патогенных сероваров
Эпизоотия лептоспироза в связи с прессингом вакцинации и принятием санитарных мер, основанных на дератизации и дезинфекции структур жилья собак, изменилась. Во Франции инфицирование собак, вызванное серогруппой Canicola, в сравнении с другими серогруппами ослаблено. Причиной инцидентности разных патогенных сероваров Icterohaemorrhagiae и Canicola можно объяснить также увеличением числа контактов между собаками и хозяевами резервуаров — крысами. Симптоматология лептоспироза варьируется в зависимости от персистирующего в организме серовара с тяжёлым, умеренным или асимптоматичным течением заболевания. Изолированная острая почечная недостаточность может быть проявлением инфицирования этими необычными сероварами, которые иллюстрировались в данном клиническом случае.
Иногда также можно увидеть асимптоматическое течение заболевания, как и в нашем случае, где две собаки имели общее содержание антител против Австралийского серовара и Гриппотифоза без патологического проявления. Высокая инцидентность других сероваров лептоспир в отличие от Icterohaemorrhagiae и Canicola в нашем исследовании аттестована частотой инфицирования через патогенные лептоспиры, относящиеся к серогруппам, не входящим в изготовленные вакцины (G. Andre- Fontaine, 2006; A. Kadjo, 2008; C. Lefur, J. Bellin, 2006; J.E. Stokes, J.B. Kaneene, W.D. Schall et coll., 2007).
Это умеренное клиническое течение, а также латентное, преимущественно не диагностирующиеся, при котором животные всегда являются переносчиками лептоспир, является также потенциальным риском зооноза для человека. Вакцинация может играть роль в проявлении скрытых клинических течений заболевания, защищая животных от болезни, но не от инфекции и носи- тельства возбудителя в почках (G. Andre-Fontaine, J. Hernandez, 2008; G. Andre-Fontaine, 2006).
Значимость и ограничение вакцинации против лептоспироза
Вакцины, которыми в настоящее время располагают во Франции, состоят из инактивируемых суспензий двух сероваваров Leptospira interrogans — Icterohaemorrhagiae и Canicola. Эти вакцины обеспечивают защиту против инфицирования двумя сероварами лептоспир, которые снизили тяжесть симптоматики заболевания и ограничили экскрецию бактерий с мочой и персистенцию — носительство их в почках (G. Andre-Fontaine, J. Hernandez, 2008; G. Andre-Fontaine, C. Branger, A.W. Gray et coll., 2003; J.M. Minke, R. Bey, J.P. Tronel et coll., 2009; P. Schreiber, V. Martin, W. Najbar et coll., 2005).
Тем не менее вакцинация не обеспечивает в полной мере выраженную перекрестную защиту, чтобы упредить инфицирование другими сероварами. Таким образом, три собаки в нашем исследовании располагают общим высоким уровнем антител по отношению только к Австралийскому серовару или таковому Гриппотифозе, причастных к их инфицированию. Сами результаты согласно их адекватности с данными серологических анализов у собаки, где имеют место серогруппы Icterohaemorrhagiae, Australis и Grippotyphosa, является наиболее презентабельными (G. Andre- Fontaine, 2004; A. Kadjo, 2008; C. Lefur, J. Bellin, 2006; J.E. Stokes, J.B. Kaneene, W.D. Schall et coll., 2007). Несмотря на это, вакцинация может ослабить клиническое проявление этих патогенных сероваров, улучшая, таким образом, прогноз выживаемости инфицированной собаки, но вызывающая осложнение о клиническом предположении данного заболевания (G. Andre-Fontaine, J. Hernandez, 2008; C. Sonrier, C. Branger, V. Michel, Ruvoen-Clouet et coll., 2000).
Ни одной прямой корреляции между общими титрами агглютинирующих антител по отношению к сероварам Icterohaemorrhagiae и Canicola, и защитными свойствами референс вакцин не наблюдали (J.M. Minke, R. Bey, J.P. Tronel et coll., 2009). Результаты серологического исследования показывают, что общее содержание иммуноглобулинов быстро снижается во времени: 4 собаки из 29 обследованных имеют предельно низкие титры антител по отношению к серогруппам Icterohaemorrhagiae и/или Canicola, несмотря на вакцинацию, которая была выполнена 10 месяцев назад.
Наличие данных эпизоотологического исследования с повышенным бактериальным прессингом в основном по отношению к сероварам Icterohaemorrhagiae и Canicola указывает на необходимость проведения полугодичной ревакцинации, которая с точки зрения защиты может оказаться наиболее эффектной (C.E. Grenee, M.A. Miller, C.A. Brown, 1998).
Лептоспироз у собак — это серьёзный зооноз, никогда не утрачивающий своей актуальности. Его эпизоотия эволюционирует в связи с большим числом видов хозяев, резервуаров, климатических условий и наиболее частых осложнений заболевания разными сероварами, которые обычно имеют место (Canicola и Icterohaemorrhagiae). Проведение исследований на данное заболевание всегда должно быть ориентировано на этиотропную диагностику с поражением почек или печени.
Основные положения
1. Лептоспироз должен составлять часть дифференциальной диагностики изолированной острой почечной недостаточности.
2. Тест на микроагглюцинацию позволяет провести идентификацию причинного серовара Leptospira interrogans. Кинетика антител (двукратное титрование с минимальным интервалом) подтверждает недавнее инфицирование.
3. Эпизоотия лептоспироза модифицируется в связи с наиболее частым обнаружением сероваров лептоспир, не входящих в группу Canicola и Icterohaemorrhagiae, ответственных за данное заболевание.
4. Вакцинация собак против лептоспироза в настоящее время не вызывает защиты от лептоспир, не относящихся к сероварам Canicola и Icterohaemorrhagiae.
СВМ № 4/2010