Цитологическая диагностика лейшманиоза у собаки

Ж.-П. Буфис

Leishmania infantum — это возбудитель протозоонозного заболевания, который передается собакам через укус двукрылыми насекомыми большого размера, относящимися к роду Phlebotomus.

Инфицированная собака может не иметь клинических симптомов или болеть с длительным эволюционирующим развитием, проявляющимся нестабильными и сильно варьирующимися клиническими симптомами: исхудание, потеря формы, аденомегалия, изъязвление кожного покрова и слизистых, сквамозность, наличие узелков или «новообразований» лейшманиен, эпистаксис и болевая реакция. Лейшманиоз — это зооноз. В практической ветеринарии встречается довольно часто, и инфицирование в основном диагностируется при лабораторном исследовании методом серологической диагностики, при постановке которой совсем недавно стали использовать метод ПЦР. Тем не менее, быструю диагностику осуществляют методом клинического обследования во время консультации, что имеет очевидную значимость.

Фото 1. Амастиготная форма Leishmania infantum: ядро и кинетопласт хорошо визуализируются (стрелка) (кожное калькирование Diff Quik ×1000).

Набор быстрых диагностических тестов или непосредственное обнаружение паразита методом цитологического исследования позволяет в большинстве случаев поставить диагноз, как говорят, у «изголовья пациента». Амастиготная1 форма Leishmania infantum, которую мы находим у собаки, имеет небольшой размер (2-6 мкм), овоидную или парусовидную форму, характеризуется наличием базофильного ядра и кинетопласта в форме палочки, который может быть более окрашен, чем само ядро и часто имеет перпендикулярное положение по отношению к последнему (фото 1).


1 Амастиготный (гр. a-частица; mastix, mastigos, хлыст) [англ. amastigot]. Отсутствие жгутиков. Син. форма лейшмании. Эволютивная внутриклеточная стадия некоторых жгутиковых (Leismania, Tripanosome).


Лейшмании в некоторых случаях редко обнаруживают в образце исследуемого материала. В частности, мы их с трудом находим у собак с лейшманиозом в основном при очень быстрой клинической эволюции или у животных в процессе лечения. Следовательно, мы не можем исключить лейшманиоз, если не находим паразита в образце исследуемого нами материала. И наоборот, обнаружение лейшманий происходить достаточно легко и быстро в определенных условиях, что собственно и позволяет поставить окончательный диагноз. Техника калькирования и пункционная биопсия внутренних органов уже описаны, и в данном случае мы не будем прибегать к их интерпретации. Все используемые красители для быстрой окраски позволяют выявить паразита. У инфицированной собаки лейшмании можно определить более или менее легко в следующих основных органах: костный мозг, лимфатические узлы, кровь, кожный покров, узелки или так называемые «новообразования» лейшманий, глаз. Пункционная биопсия селезенки, осуществляемая некоторыми авторами, не вызвала проблем, но мы в данном случае описывать ее не будем. Исходя из выше описанного, считаем, что не следует рисковать в связи с возможностью развития геморрагий при пунктировании селезенки. Мы можем проводить пункционную биопсию лимфатических узлов или костного мозга, что осуществляют каждый день для получения биопсийного материала. В случае ошибки прибегают к серологическому исследованию с помощью ПЦР.

Фото 2. Пунктат костного мозга: большое скопление лейшманий вокруг одной ретикулярной клетки. Собака подвержена лечению азатиоприном (имураном) (Diff Quik ×1000).

Поиск лейшманий в костном мозге является наиболее простым способом: паразиты в нем накапливаются в достаточно большом количестве и часто группируются вокруг больших ретикулярных клеток в виде сгустков, иногда видимых при 100-кратном увеличении. Подсвечивание дна предметного стекла облегчает поиск (фото 2). Когда лейшманий обнаружить не удается, то наличие большого числа плазмоцитов на предметном стекле требует проведения дополнительных исследований (при этом не следует исключать возможность миеломы, эрлихиоза и т.д.).

Фото 3. Пунктат лимфатического узла: лейшмании в клетке гистиоцита или локализуются экстрацеллюлярно (Diff Quik ×1000).

Считаем, что пункция лимфоузлов в сравнении с костным мозгом менее значима: лейшмании встречаются значительно реже, более диссеминированы и менее прочно фиксируются на дне окрашенного мазка, получаемого из лимфатического узла (фото 3). Лимфоидные клетки, плотно расположенные по отношению друг к другу, затрудняют поиск. Если, несмотря на это, вы решили проводить пункцию лимфоузлов, то следует выбирать лимфоузел, который легко доступен и гипертрофирован. Пункцию его можно выполнить в течение нескольких секунд при проведении консультации владельца. Как и в случае с костным мозгом, если имеется большое количество плазмоцитов и увеличено пропорциональное соотношение центробластов и иммунобластов, то следует продолжать поиск лейшманий.

Фото 4. Калькирование кожного узла: большое сколпение лейшманий, паразитирующих в макрофагах (Diff Quik ×1000).

Кожное калькирование не относится к более чувствительному методу исследования, но в виду простоты исполнения имеет преимущество (выполнение мазка за счет капли лимфы, которую в виде экссудата из поврежденного кожного покрова получают в основном путем нажатия). Таким образом, лейшманиоз можно диагностировать случайно при исследовании кожного покрова (фото 1, 4). Выполнение калькирования также возможно при получении биопсийного материала из кожного покрова.

Фото 5. Мазок крови: лейшмании, персистирующие в лимфоците (Diff Quik ×1000).

Мазки крови не являются преимущественным методом постановки диагноза на лейшманиоз. Лейшмании редко находятся в крови, но, тем не менее, могут в ней присутствовать: мы их обнаруживаем в мазках крови, полученной из ушной раковины, а также из центральной вены при добавлении антикоагулянта EDTA. Следовательно, паразиты могут быть обнаружены в какой-то степени случайно при исследовании мазков крови собаки, у которой не было предположения о заболевании лейшманиозом. Их обнаруживают в цитоплазме лимфоцита (фото 5) или макрофага, иногда полинуклеарной клетки и даже в экстрацеллюлярном пространстве. Если лейшманий обнаружить не удается, то мазки крови, как нам кажется, не могут дать косвенных ориентиров для продолжения их поиска (в основном нет качественных изменений в формуле крови).

Фото 6. Пункция «новообразования», локализующегося под языком: лейшмании в клетке гистиоцита (стрелка). Множество лимфоцитов и плазмоцитов (справа) (Diff Quik ×1000).

Узелки кожного покрова не являются редкостью при заболевании лейшманиозом. Речь иногда идет о настоящих «опухолях» с размером, незначительно превышающим один из органов. Эти «образования» формируются в основном в начале лечения. Их лейшманигенная природа часто распознается лишь при иссечении и последующем проведении гистоморфологического исследования. Но постановку окончательного диагноза можно провести в период консультации, если существует привычка проводить пункционную биопсию образования для проведения цитологического анализа в предоперационный период. Диагностика в основном не представляет сложности, потому что «новообразования» — лейшманиомы часто нафаршированы паразитами. Тем не менее, это не всегда так (фото 6), поэтому при отсутствии лейшманий обнаружение в мазке большого количества плазмоцитов и лимфоидных клеток должно привлечь внимание клинициста.

Фото 7. Пункция передней камеры глаза: скопление лейшманий в макрофагах (Diff Quik ×1000).

Лейшманиоз может проявиться в форме кератоконъюнктивита и рецидивирующего увеита, часто ведущего к потере глаза. Эти повреждения часто появляются у собак при перманентном (постоянном) лечении. Мы наблюдали такой случай один раз пять лет назад на фоне назначения аллопуринола в ассоциации с глюкантимом (Glucantime ND) в соответствии с нашей схемой лечения. Если повреждение глаза носит изолированный характер, то можно провести цитологическое исследование в простом образце материала, полученном из конъюнктивы, или же путем пунктирования передней камеры глаза при исследовании кератоконъюнктивитов и увеитов (фото 7).

Лейшманий также можно обнаружить в синовиальной жидкости при артритах и в секретах.

СВМ 3/2004

 

Подпишитесь на наш телеграм-канал и получайте важные отраслевые новости в удобном для вас формате.
Оценить материал
Нравится
Нравится Поздравляю Сочувствую Возмутительно Смешно Задумался Нет слов
Теги

Добавить комментарий

Войти с помощью: 

Подписка на новости

После отправки заполненной формы Вам на почту придёт письмо со ссылкой для подтверждения рассылки. Если Вы не видите письма, проверьте папку «Спам». Если не подтвердить рассылку, мы не сможем отправлять её Вам.






Нажимая на кнопку «Подписаться», я даю согласие на обработку персональных данных
Я ознакомлен с политикой конфиденциальности

Close