Костные маркеры крови при нормально заживающих и инфицированных моделях перелома кости у собаки. Сравнительное исследование

Аннотация

Биохимические костные маркеры широко используются в медицине человека для контроля плана лечения и мониторинга клеточной активности при метаболических нарушениях костной ткани и связанных с ними заболеваниях. Целью настоящего исследования был мониторинг изменений концентрации сывороточных костных маркеров на экспериментальных моделях нормально заживающего и осложнённого перелома бедренной кости собаки. Двенадцать собак разделили на две группы: группу I (шесть собак) с экспериментальным нормальным заживлением переломов (НЗ) и группу II с экспериментально вызванным посттравматическим остеомиелитом бедренной кости (ОМ). Более двух месяцев после операции производилась оценка клинических (ЧСС, ЧД, температура тела) и рентгенологических параметров. К концу первой, второй, третьей и четвёртой недель после операции брались анализы крови на маркеры формирования (общая и костная щелочная фосфатаза, остеокальцин) и резорбции кости (карбокситерминальный телопептид коллагена I типа — ICTP). В группе НЗ сывороточные концентрации ICTP были статистически значимо повышены в конце первой и второй недель после операции, а затем возвращались к норме. В группе ОМ ICTP был значительно повышен к концу второй недели и оставался высоким до конца второго месяца. Первоначальное повышение возникло до появления специфических рентгенологических признаков. В группе ОМ костная щелочная фосфатаза и остеокальцин также были значимо выше, но быстро снижались до изначальных концентраций.

Введение

Биохимические костные маркеры широко используются в медицине человека для контроля плана лечения и мониторинга клеточной активности при метаболических нарушениях костной ткани и связанных с ними заболеваниях [28]. Они служат идеальным вариантом для изучения животных моделей остеопороза, метастазов опухолей в кости и некоторых форм артрита [20; 32; 6].

Несмотря на сильную корреляцию между костными маркерами крови и мочи и гистоморфометрическими показателями ремоделирования кости [10], окончательный диагноз остеопороза и болезни Педжета ставится после денситометрии и/или биопсии.

У животных костные маркеры использовались для установления различий между выраженностью формирования и резорбцией костей у лошадей [25; 29] и кошек [7; 8] разных возрастов. У собак костные маркеры детально изучены, но только в плане различий, связанных с породой, возрастом и другими факторами [1–3; 23; 5]. Также описано их клиническое применение при остеосаркомах и остеоартрите [11; 16; 14], удалении лучевой кости [15], мониторинге дистракционного остеогенеза [24], мониторинге в случаях замедленного срастания или несращения переломов трубчатых костей [21].

Некоторые маркеры резорбции кости или неспецифичны, как гидроксипролин мочи, или требуют трудоёмкого анализа методом высокоэффективной жидкостной хроматографии, как пиридинолиновые связи коллагена [9]. Эти анализы, однако, считаются неспецифическими для коллагена I типа, который составляет около 90% органического костного матрикса [33]. По этой причине для мониторинга активности костной резорбции был предложен карбокситерминальный телопептид коллагена I типа (ICTP) [30]. У людей сывороточный ICTP повышался при ряде заболеваний, сопровождающихся генерализованной или локальной деструкцией кости, например, при множественной миеломе [12] и ревматоидном артрите [30]. Данные об изменениях биохимических костных маркеров крови в процессе заживления переломов и при развитии посттравматического остеомиелита у собак весьма ограничены. Таким образом, целью настоящего исследования было проследить изменения некоторых сывороточных маркеров костного метаболизма, возникающие на ранних стадиях нормального заживления кости (в течение одного месяца) и сравнить их с изменениями, возникающими при посттравматическом остеомиелите собак.

Материалы и методы

Подбор животных

Эксперименты были проведены в 2003–2005 гг. на 12 помесных кобелях 1–3 лет. Они были разделены на две группы по шесть собак: группу I с нормально заживающими переломами (группа НЗ) и группу II, в которой был экспериментально воспроизведён посттравматический (после перелома) остеомиелит (группа ОМ). Собаки содержались в индивидуальных боксах, получали сухой корм для взрослых собак (Jambo-dog®, Gallisman-94 S.A., Болгария) и имели неограниченный доступ к питьевой воде. Перед экспериментом все собаки получили лечение от эктопаразитов (Fipronil, Frontline®, Mérial, Франция) и эндопаразитов празиквантелом/пирантела памоатом (Azipyrin®, Balkanpharma, Болгария).

Протокол анестезии

В протокол анестезии входила премедикация атропина сульфатом (Sopharma, Болгария) в дозе 0,02 мг/кг п/к и ацепромазина малеатом (Neurotranq, Alfasan, Голландия) в дозе 0,05 мг/кг в/м. Через 15 минут собак вводили в наркоз 2,5% тиопентоном натрия (Thiopental, Biochemie GmbH, Австрия) в дозе 6 мг/кг в/в, затем интубировали и поддерживали анестезию 2,5 об.% галотана (Narcotan, Spofa, Чешская Республика).

Дизайн эксперимента

Всем собакам после асептической обработки из бокового доступа была выполнена чрезнадкостничная остеотомия диафиза одной бедренной кости.

В группе НЗ фрагменты были зафиксированы интрамедуллярным штифтом, вставленным через межвертельную ямку (интрамедуллярный остеосинтез). В группе ОМ фрагменты также фиксировались интрамедуллярным штифтом. Перед фиксацией на каждый костный фрагмент нанесли 0,5 мл смешанной бактериальной культуры, состоящей из равных частей E. coli 026 и Ps. aeruginosa в концентрации 105 КОЕ/мл. Мягкие ткани были рутинно ушиты в обеих группах. В послеоперационном периоде более двух месяцев производилась оценка клинических (ЧСС, ЧД, ректальная температура) и рентгенологических параметров, чтобы проконтролировать заживление в группе НЗ и развитие остеомиелита в группе ОМ. Лабораторные анализы крови выполнялись еженедельно до конца четвёртой недели.

Образцы крови забирались между 7.30 и 8.00 утра (чтобы устранить влияние суточного цикла) перед операцией и в конце первой, второй, третьей и четвёртой недель после операции. В те же временные интервалы и в конце второго месяца делались медиолатеральные рентгенограммы оперированных конечностей.

Исследовались сывороточные концентрации следующих маркеров:

1) активность общей и костной щелочной фосфатазы (ЩФ) — коммерческий колориметрический набор (Biotrol, Франция);

2) остеокальцин сыворотки — набор для радиоиммунологического анализа (Henning Berlin GmbH, Германия);

3) карбокситерминальный телопептид коллагена I типа (ICTP) — набор для радиоиммунологического анализа (Оrion Diagnostica, Финляндия).

Исследования с помощью РИА проводились дважды, после чего получали среднее значение.

Статистическая обработка результатов проводилась методом однофакторного дисперсионного анализа.

Результаты

При проведении клинических осмотров собак из группы НЗ никаких осложнений не наблюдалось. В группе ОМ отмечался выраженный болезненный горячий на ощупь отёк на оперированных бёдрах. Ректальная температура была повышена у всех животных этой группы (от 39,8° до 40,7°С). В течение 3–6 дней швы у всех шести собак нагноились, припухлость спонтанно вскрылась и истекла гноем. К 20-му дню в разных областях сформировались фистулы, из которых выходил скудный экссудат. У четырёх собак в области остеотомии отмечалась крепитация, признак дестабилизации остеосинтеза. Хромота была выраженной до конца эксперимента.

До конца второй недели в обеих группах видимых рентгенологических изменений в костях не наблюдалось. На рентгенограммах бёдер собак из группы ОМ (рис. 1) отмечались зоны просветления в прилегающих мягких тканях из-за скопления гнойного экссудата. К концу третьей недели наблюдались фиссуры, тонкая периостальная реакция разной протяжённости и признаки начинающейся секвестрации. К концу четвёртой недели секвестры хорошо дифференцировались у всех шести собак, хорошо визуализировалась периостальная реакция, а соединения костных фрагментов не произошло. Секвестры окружала вновь образовавшаяся ткань (периостальная костная мозоль). Спустя месяц (к концу второго месяца после операции) были хорошо видны остеосклеротические изменения вокруг секвестров. Периостальная мозоль наблюдалась и на дистальном, и на проксимальном фрагментах, но она не переходила через линию перелома. Штифты были расшатаны из-за прилегающего остеолитического процесса.

Результаты биохимических анализов крови собраны в таблице 1. В группе НЗ концентрации ICTP выросли с начальных значений 3,78±0,28 нг/мл до 4,62±0,21 нг/мл к концу первой недели (P<0,05). Этот костный маркер оставался значимо повышенным до конца второй недели (P<0,05) и вернулся к начальному уровню к концу четвёртой недели. Активность общей и костной ЩФ снизилась к концу первой недели, тогда как остеокальцин сыворотки повысился, но статистически незначимо. До завершения эксперимента колебания их уровней также не имели статистической значимости.

Общая ЩФ в группе ОМ повысилась незначимо, тогда как костный изофермент значимо повысился к концу первой недели (7,68 ед./л; P<0,01) и особенно к концу второй недели (12,54 ед./л; P<0,01).

Динамика ICTP сыворотки в этой группе характеризовалась продолжительным повышением с 3,77 нг/мл вначале до 8,80 нг/мл (P<0,001) к концу второй недели, 15,70 нг/мл (P<0,05) к концу третьей недели и 15,50 нг/мл (P<0,01) к концу первого месяца.

Статистически значимая разница между группами отмечалась к концу первой недели — в активности общей ЩФ (P<0,05), к концу второй недели — в уровне остеокальцина сыворотки (P<0,001). Разница в уровне ICTP была статистически значимой и в конце второй (P<0,05), и в конце третьей и четвёртой недель (P<0,001).

Рис. 1. Медиолатеральные рентгенограммы бедра собаки из группы ОМ в конце первой, второй, третьей, четвёртой и восьмой недель после операции (с A по Д соответственно)

Таблица 1. Динамика нескольких костных маркеров крови у собак с нормально заживающим переломом (НЗ) и экспериментально вызванным остеомиелитом (ОМ). Представлены средние значения ± стандартное отклонение (n=6)

Обсуждение

Заживление перелома кости — это локальный процесс, который отражается на системном минеральном гомеостазе. В минеральном обмене участвуют витамины, гормоны, ферментные системы и пр. Помимо рентгенографии для мониторирования формирования мозоли можно успешно использовать несколько костных маркеров. Этот процесс характеризуется изощрённым взаимодействием между резорбцией и формированием костной ткани, и поэтому для нашего исследования мы выбрали биохимические маркеры обоих составляющих процесса.

На маркеры костного метаболизма влияют такие факторы, как возраст, питание, физическая нагрузка [31; 35] и время забора образца [26; 23]. Собаки, включённые в исследование, завершили рост, кормились одинаково и содержались поодиночке, а образцы крови забирались только утром, чтобы исключить суточные колебания. Хотя собаки не были чистокровными, это не повлияло на результат, потому что порода и масса тела не отражаются на исследованных биохимических маркерах [5].

Kurdy [22] изучил роль пропептидов коллагена I и III типов и костной ЩФ при плохо заживающих переломах диафиза большеберцовой кости у людей. Он обнаружил, что статистически значимого снижения костной ЩФ и пропептидов к 10-й неделе после травмы не наблюдается, однако повышается уровень пропептида коллагена III типа. Тем не менее после 12-й недели имели место данные о недостаточном остеобластном ответе. При нормально заживающем переломе, напротив, костная ЩФ снизилась незначимо.

Исследуя концентрации костной ЩФ, остеокальцина и телопептида, Emami и соавт. [13] установили, что при медленно заживающих переломах большеберцовой кости у людей уровень резорбции кости соответствовал таковому при нормальном заживлении до четырёх недель, тогда как формирование кости возникало позже (около 10—16-й нед.). В нашем исследовании переломов бедренных костей у собак маркер резорбции (ICTP) был статистически значимо повышен в течение второй недели и опустился до нормы к концу четвёртой недели. Это соответствует процессу остеолиза вокруг концов костных фрагментов, который у собак, вероятно, возникает раньше.

Информация о костной ЩФ и остеокальцине подтвердилась, т.е. в течение исследования они или снижались (костная ЩФ), либо не менялись (остеокальцин), при том что переломы срастались без осложнений. Таким образом, наши результаты похожи на результаты Akesson и соавт. [4], описавших серьёзные нарушения костного метаболизма при клиновидной остеотомии большеберцовой кости и более сложный мониторинг остеопороза. По маркерам сыворотки и мочи авторы доказали, что после остеотомии (перелома) резорбция кости превышает её формирование.

Остеокальцин может быть ранним маркером медленного заживления перелома у людей, если он остаётся неизменным после четырёх недель, тогда как при нормально заживающих переломах он статистически значимо повышается [18]. Nyman и соавт. [1991] наблюдали в схожих условиях выраженное повышение остеокальцина и костной ЩФ после шести недель в обеих группах с последующим снижением их концентрации в группе нормально заживающих переломов и сохранением на высоком уровне в другой группе, хотя и с незначимой разницей между группами. Результаты по нормально заживающим переломам подтверждены и нашим экспериментом (изменения остеокальцина были минимальными, а костная ЩФ снизилась почти в два раза).

Komnenou и соавт. [21] описали корреляцию между общей ЩФ сыворотки и заживлением спонтанных переломов трубчатых костей у собак. Уже на десятый день после перелома общая ЩФ статистически значимо повышалась и возвращалась к норме на 30-й день. По нашему мнению, более верным будет оценивать не только общую, но и костную ЩФ, которая является более чувствительным маркером костного метаболизма. В наших экспериментах активность костной ЩФ снижалась в конце первой недели после операции на фоне сохранения уровня общей ЩФ. Это соответствует полученным Akesson и соавт. [4] данным о превалировании резорбции над формированием кости на ранних этапах после остеотомии большеберцовой кости.

После первой недели в группе ОМ отмечалась стойкая тенденция к увеличению концентрации ICTP в сыворотке до конца первого месяца, сопровождавшаяся усиленным формированием кости в первые две недели (что подтверждается статистически значимым повышением костной ЩФ и остеокальцина). У собак из группы НЗ, напротив, отмечался наивысший уровень резорбции кости в первые две недели, после чего она вернулась в норму. Эти отличия можно отнести к более распространённым остеолитическим процессам при остеомиелите, сопровождающимся сильной периостальной реакцией вначале, тогда как при нормальном заживлении стадия резорбции короткая на фоне относительно постоянного уровня формирования кости.

Остеомиелит — это инфекционное воспалительное заболевание кости с хроническим прогрессирующим течением без тенденции к спонтанному выздоровлению [19]. К специфическим изменениям в кости вследствие инфекции относятся локальные деструкции и реактивное формирование новой костной ткани. Динамика исследованных сывороточных костных маркеров показала общее повышение концентрации маркеров формирования кости к концу первой-второй недели. Это можно объяснить ускорением биологических процессов в кости, или так называемым местным феноменом ускорения (МФУ) [36]. Типичная для остеомиелита деструкция кости визуализировалась на рентгенограмме только к концу эксперимента, т.е. когда около 30% минерального вещества кости было резорбировано [34], тогда как уровень ICTP сыворотки был статистически значимо повышен уже к концу второй недели.

По мнению Gillespie [17], поражение кости при остеомиелите может быть связано с высвобождением лизосомальных ферментов из полиморфоядерных лейкоцитов, но также возможна активация костных макрофагов, таких как остеокласты. Резкое повышение сывороточного телопептида, продукта деградации коллагена I (костного) типа, говорит в пользу второй версии.

Следует подчеркнуть, что пики сывороточных концентраций маркеров формирования и резорбции кости возникали не одновременно. Наиболее выраженное формирование кости (которое показывает наивысший уровень активности костной ЩФ) опережало пик резорбции (наивысший уровень ICTP) на одну неделю. Эти переменяющиеся периодические флюктуации активности двух основных процессов ремоделирования кости объясняют типичную мозаическую структуру костной трабекулы.

При обсуждении изменений биохимических показателей ремоделирования кости в ходе развития остеомиелита следует учитывать возможный эффект ещё одного фактора, хотя его роль окончательно не ясна, — иммобилизации после операции и костной инфекции, приводящей к остеопорозу. Есть данные, что у людей остеопороз также сопровождается повышением карбокситерминального телопептида [10; 4]. Роль иммобилизации при остром остеомиелите, с нашей точки зрения, не важна. Для её выяснения требуются дальнейшие эксперименты, которые находятся вне рамок нашего исследования.

Итак, концентрация карбокситерминального телопептида коллагена I типа у собак с нормальным заживлением перелома бедренной кости статистически значимо повысилась к концу первой недели и оставалась повышенной до конца второй недели, а затем вернулась к норме. У собак с экспериментально вызванным остеомиелитом этот костный маркер значительно повысился к концу второй недели и оставался повышенным до конца четвёртой недели. Первоначальное повышение возникло раньше, чем процесс стал визуализироваться на рентгенограмме.

Так как ранняя рентгенологическая диагностика остеомиелита затруднена или невозможна, при подозрении на костную инфекцию или послеоперационные осложнения рекомендуется определение биохимических маркеров резорбции кости. В течение первой и второй недель развития остеомиелита костная щелочная фосфатаза и остеокальцин статистически значимо повышаются, но быстро возвращаются к норме.

Литература

1. Allen, M. J., W. E. Hoffmann, D. C. Richardson & G. J. Breur, 1998. Serum markers of bone metabolism in dogs. American Journal of Veterinary Research, 59, 250–254.
2. Allen, L. C., M. J. Аllen, G. J. Breur, W. E. Hoffmann & D. C. Richardson, 2000a. A comparison of two techniques for the determination of serum bone-specific alkaline phosphatase activity in dogs. Research in Veterinary Science, 68, 231–235.
3. Allen, M. J., L. C. V. Аllen, W. E. Hoffmann, D. C. Richardson & G. J. Breur, 2000b. Urinary markers of type I collagen degradation in the dog. Research in Veterinary Science, 69, 124–127.
4. Akesson, K., S. M. Kakonen, P. O. Josefsson, M. K. Karlsson, K. J. Obrant & K. Petersson, 2005. Fracture-induced changes in bone turnover: A potential confounder in the use of biochemical markers in osteoporosis. Journal of Bone and Mineral Metabolism, 23, 1–6.
5. Breur, G. J., M. J. Allen, S. J. Carlson & D. C. Richardson, 2004. Markers of bone metabolism in dog breeds of different size. Research in Veterinary Science, 76, 53–55.
6. Chavassieux, P., P. Garnero & E. Duboeuf, 2001. Effects of a new selective estrogen receptor modulator (MDL 103,323) on cancellous and cortical bone in ovarectomized ewes: A biochemical, histomorphometric and densitometric study. Journal of Bone and Mineral Research, 16, 89–96.
7. DeLaurier, A., B. Jackson, K. Ingham, D. Pfeiffer, M. A. Norton & J. S. Price, 2002. Biochemical markers of bone turnover in the domestic cat: Relationships with age and feline osteoclastic resorptive lesions. Journal of Nutrition, 22, 1742–1744.
8. DeLaurier, A., B. Jackson, D. Pfeiffer, K. Ingham, M. A. Norton & J. S. Price, 2004. A comparision of methods for measuring serum and urinary markers of bonemetabolism in cats. Research in Veterinary Science, 77, 29–39.
9. Delmas, P. D., D. M. Wilson, K. G. Mann & B. L. Riggs, 1983. Effect of renal function on plasma levels of bone Gla protein. Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 57, 1028–1030.
10. Eastell, R., P. D. Delmas, S. F. Hodgson, E. F. Eriksen, K. G. Mann & B. L. Riggs, 1988. Bone formation rate in older normal women: Concurrent assessment with bone histomorphometry, calcium kinetics and biochemical markers. Journal of Clinical Endocrinology and Metabolism, 67, 741–748.
11. Ehrhart, N., W. S. Dernell, W. E. Hoffmann, R. M. Weigel, B. E. Powers & S. J. Withrow, 1998. Prognostic importance of alkaline phosphatase activity in serum from dogs with appendicular osteosarcoma: 75 cases (1990-1996). Journal of the American Veterinary Medical Association, 213, 1002–1006.
12. Elomaa, I., P. Virkkunen, L. Risteli & J. Risteli, 1992. Serum concentration of the cross-linked carboxyterminal telopeptide of type 1 collagen (ICTP) is useful prognostic indicator in multiple myeloma. British Journal of Cancer, 66, 337–341.
13. Emami, A., A. Larsson, M. Petren-Mallmin & S. Larsson, 1999. Serum bone markers after intramedullary fixed tibial fractures. Clinical Orthopaedics and Related Research (Abstract), 368.
14. Fox, D. B & J. L. Cook, 2001. Synovial fluid markers of osteoarthritis in dogs. Journal of the American Veterinary Medical Association, 219, 756–761.
15. Francis, D. A. & D. L. Millis, 2002. Trends observed in bone metabolism markers from dogs following radial ostectomy. Veterinary Comparative Orthopaedics and Traumatology, 2, A5.
16. Garzoto, C. K., J. Berg, W. E. Hoffman & W. M. Rand, 2000. Prognostic significance of serum alkaline phosphatase activity in canine appendicular osteosarcoma. Journal of Veterinary Internal Medicine, 14, 587–592.
17. Gillespie, W. J. & R. A. Allardyce, 1990. Mechanisms of bone degradation in infections: A review of current hypotheses. Orthopedics, 13, 407–410.
18. Herrman, M., D. Klitscher, T. Georg, J. Frank, L. Marzi & W. Herrman, 2002. Different kinetics of bone markers in normal and delayed fracture healing of long bones. Clinical Chemistry, 48, 2263–2266.
19. Hulin, M. A. L., 1970. Contribution a l’étude de l’ostéomyélite chez le chien. These de Doctorat, Ecole Nationale Vétérinaire d’Alfort, pp. 1–8.
20. Kippo, K., R. Hannuniemi & L. Lauren, 1998. Effect of clodronate treatment on established bone loss in ovarectomized rats. Bone, 23, 333–342.
21. Komnenou, A., M. Karayannopoulou, Z. S. Polizopoulou, T. C. Constantinidis & A. Dessiris, 2005. Correlation of serum alkaline phosphatase activity with the healing process of long bone fractures in dogs. Veterinary Clinical Pathology, 34, 35–38.
22. Kurdy, N. M., 2000. Serology of abnormal fracture healing: The role of PIIINP, PICP, and BsALP. Journal of Orthopaedic Trauma, 14, 48–53.
23. Ladlow, J. F., W. E. Hoffmann, G. J. Breur, D. C. Richardson & M. J. Allen, 2002. Biological variability in serum and urinary indices of bone formation and resorption in dogs. Calcified Tissue International, 70, 186–193.
24. Lammens, J., Z. Lui, J. Aerssens, J. Dequeker & G. Fabry, 1998. Distraction bone healing versus osteotomy healing: A comparative biochemical analysis. Journal of Bone and Mineral Research, 13, 279–286.
25. Lepage, O. M., L. DesCotaux, M. Marcoux & A. Tremblay, 1991. Circadian rhythms of osteocalcin in equine serum. Correlation with alkaline phosphatase, calcium, phosphate and total protein levels. Canadian Journal of Veterinary Research, 55, 5–10.
26. Liesegang, A., R. Reutter & M. L. Sassi, 1999. Diurnal variation in concentrations of various markers of bone metabolism in dogs. American Journal of Veterinary Research, 60, 949–953.
27. Nyman, M. T., P. Paavolainen, S. Forsius & C. Lamberg-Allardt, 1991. Clinical evaluation of fracture healing by serum osteocalcin and alkaline phosphatase. Annales Chirurgiae et Gynaecologiae, 80, 289–293.
28. Okazaki, R., Y. Totsuka, K. Hamano, M. Ajina, M. Miura, Y. Hirota, K. Hata, S. Fukumoto & T. Matsumoto, 1997. Metabolic improvement of poorly controlled noninsulin-dependent diabetes mellitus decreases bone turnover. Clinical Endocrinology Metabolism, 82, 2915–2920.
29. Price, J. S., B. Jackson & R. Eastel, 1995. Age related changes in biochemical markers of bone metabolism in horses. Equine Veterinary Journal, 27, 201–207.
30. Risteli, J., I. Elomaa, S. Niemi, A. Novamo & L. Risteli, 1993. Radioimmunoassay for the pyridinoline cross-linked carboxyterminal telopeptide of type 1 collagen: A new serum marker of bone resorption. Clinical Chemistry, 39, 635–640.
31. Souberbielle, J. C., C. Cormier & C. Kindermans, 1999. Bone markers of clinical practice. Current Opinion in Rheumatology, 11, 312–319.
32. Tamura, H., S. Ishii, T. Ikeda, K. Enomoto & M. Kitajima, 1999. The relationship between urinary pyridinoline, deoxypyridinoline and bone metastasis in a rat breast cancer model. Breast Cancer, 6, 23–28.
33. Uebelhart, D., D. Ongchi, D. W. Pietryla, M. C. Chapuy & E. J.-M. A. Thonar, 1992. Pyridinium crosslinks content in various tissues of three species. Bone and Mineral, 17, S134.
34. Waldvogel, F. A., G. Medoff & M. N. Swartz, 1970. Osteomyelitis: A review of clinical features, therapeutic considerations and unusual aspects (second of three parts). New England Journal of Medicine, 282, 260–266.
35. Watts, N. B., 1999. Clinical utility of biochemical markers of bone remodeling. Clinical Chemistry, 45, 1359–1368.
36. Woodard, J. C. & W. H. Riser, 1991. Morphology of fracture nonunion and osteomyelitis. Veterinary Clinics of North America and Small Animal Practice, 21, 813–799.

Источник: Bulgarian Journal of Veterinary Medicine (2010), 13, No 4, 235−244. © Paskalev M.D. 2010. This is an Open Access article distributed under the terms of the Creative Commons Attribution License, which permits unrestricted use, distribution, and reproduction in any medium, provided the original work is properly cited.

СВМ № 2/2012

Вам также могут быть интересны статьи:

Атипичный криптококковый остеомиелит клиновидной кости у мальтийской болонки

Биохимическое исследование гемостаза у собаки

Диссеминированное внутрисосудистое свёртывание крови у собак с синдромом острого расширения и заворота желудка

Определение суммарной антиоксидантной способности у собак при расширении и завороте желудка